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FGFR广泛的生和病理作用
目 录
提要……………………………………………………………………………… 1
第一章 成纤维细胞生长因子受体细胞外片段的分离纯化……………………2
1. 前言…………………………………………………………………… 2
1.1 成纤维细胞生长因子受体简介……………………………………… 2
1.1.1 成纤维细胞生长因子受体的结构特征………………………………2
1. 1.2 编码FGFR 的基因……………………………………………………3
1.1.3 FGFR 与FGF 、硫酸乙酰肝素的结合……………………………… 4
1. 1.4 FGFR 广泛的生理和病理作用 ………………………………………5
1.2 FGFR 的表达及纯化………………………………………………… 6
1.2.1 GST 融合蛋白表达系统………………………………………………6
2. 实验材料和方法………………………………………………………… 8
2.1 材料、仪器和试剂…………………………………………………… 8
2.1.1 材料……………………………………………………………………8
2.1.2 仪器……………………………………………………………………8
2.1.3 试剂……………………………………………………………………8
2.2 实验方法……………………………………………………………… 9
2.2.1 蛋白质的诱导表达…………………………………………………… 9
2.2.2 树脂的预处理………………………………………………………… 9
2.2.3 GST 及FGFR-GST 蛋白的分离纯化…………………………………9
3. 结果与讨论………………………………………………………………11
3.1 GST-EFGFR 和GST 蛋白的表达…………………………………… 11
3.2 GST-FGFR 与GST 蛋白的分离纯化………………………………… 11
3.3 表达的EFGFR 结合活性的检测…………………………………… 12
第二章成纤维细胞生长因子受体细胞外片段的特异性抗体的筛选…………14
1.前言……………………………………………………………………… 14
1.1 噬菌体抗体库简介…………………………………………………… 14
1.2 噬菌体抗体库的种类………………………………………………… 14
1.3 噬菌体抗体库的构建……………………………………………… 15
1.4 人源scFv 噬菌体抗体库的制备流程……………………………… 16
1.5抗体库载体的选择………………………………………………… 17
1.6噬菌体抗体库的筛选……………………………………………… 18
1.7噬菌体抗体库的应用前景………………………………………… 19
1.8利用KD值的变化检测抗体库的筛选效率………………………… 20
2.实验材料和方法…………………………………………………… 21
2.1.1材料…………………………………………………………………21
2.1.2仪器…………………………………………………………………21
2.1.3试剂…………………………………………………………………21
2.2实验方法………………………………………………………………23
2.2.1辅助噬菌体的制备…………………………………………………23
2.2.2抗体库的扩增及亚库的制备………………………………………24
2.2.3筛选前抗体库多样性的验证………………………………………24
2.2.4噬菌体抗体的筛选和鉴定…………………………………………26
2.2.5噬菌体抗体的表达…………………………………………………28
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