021第二十一章-1.ppt

概 述 流动相是液体的色谱法称为液相色谱法，液相色谱可分为平板色谱和柱色谱，前者如纸色谱和薄层色谱，后者如离子交换柱色谱等，近年来，在液相柱色谱中，采用颗粒十分细的固定相及高压泵的色谱法称为高效液相色谱法。 与气相色谱法比较，液相色谱法不受样品挥发度和热稳定性的限制，非常适合于分离生物大分子、离子型化合物、不稳定的天然产物以及其各种高分子化合物等。 §21-1 高效液相色谱仪 一、液相色谱的速率理论 见 P386 公式(21-1)。 二、液相色谱的柱外谱带展宽 Hex = (? r2 u)/(24DM) Hex – 板高 r – 管子的半径 u - 流动相的线速度 DM – 溶质在流动相中的扩散系数 §21-2 高效液相色谱仪 高效液相色谱仪一般分为四个部分：高压输液系统，进样系统，分离系统和检测系统，此外还可以根据一些特殊的要求，配备一些附属装置，如梯度洗脱，自动进样及数据处理装置等。 一、高压输液系统 高压输液系统由储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组份，核心部件是高压输液泵。 一、液相色谱仪 high performance liquid chromatograph 液相色谱仪（3） 液相色谱仪（4） 液相色谱仪 流程及主要部件 process and main assembly of HPLC 图21-增-1 HITACHI-7100 型泵外观图 图21-增- 2 高压泵工作原理示意图 液相色谱仪中的高压泵应具有如下性能： (1)有足够的输出压力，使流动相能顺利地通过颗粒很细的色谱柱，通常压力范围为250—400kg/cm2。 (2)输出流量恒定，其流量精度应在1—2%之间。 (3)输出流动相的流量范围可调，对分析仪器，一般为3mL/min；制备仪器为10-20mL/min。 (4)压力平稳，脉动小 。 二、进样系统 在液相色谱中，与气相色谱不同，柱外的谱带扩宽现象会造成柱效显著下降，尤其是使用微粒填料时，更为严重，柱外的谱带变宽通常发生在进样系统，连接管道及检测器中，故一个设计较好的液相色谱仪应尽量减少这三个区域的体积。 常用的进样方式有三种：直接注射进样，停流进样和高压六通阀进样。 三、色谱柱 在高效液相色谱中，色谱柱一般采用优质不锈钢管制作，在早期，填充剂粒度大（20-75μm），柱管径一般为2mm，柱长50—100cm，近年来，由于高效微型填料(3-10μm)的普遍应用，考虑管壁效应对柱效的影响，故一般采用管径粗（4-5mm）长度短(10-50cm)的色谱性。 四、检测系统 用于液相色谱中的检测器，除应该具有灵敏度高，线性范围宽、响应快、死体积小等特点外，还应对温度和流速的变化不敏感。 在液相色谱法中，有两类基本类型的检测器，一类是溶质检测器，它仅对被分离纷份的物理或物理化学特性有响应，属于这类检测器的有紫外，荧光、电化学检测器等，另一类是总体检测器，它对试样和洗脱液总的物理或物理化学性质有响应，属于这类检测器的有示差折光、介电常数检测器等。 图21-增-3 液相色谱检测器外观图 图21-增-4 紫外检测器原理示意图 紫外可见光、电化学检测器的流通池比较 图21-增-5 荧光检测器原理示意图 紫外光电二极管阵列检测器 紫外检测器的重要进展； 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。 光电二极管阵列检测器 紫外普通检测器和光电二极管阵列检测器的比较 P389表21-1 列出了一些检测器的性能。 五、附属系统 液相色谱仪的附属装置依使用者的要求而异，通常附属装置包括脱气，梯度洗脱，再循环、恒温、自动进样，馏分收集以及数据处理等装置。 §21-3 分配色谱 一、化学键合固定相 目前，键合固定相一般采用硅胶为基体，利用硅胶表面的硅醇基（Si-OH）与有机分子之间成键，即可得到各种性能的固定相，一般说来，键合上去的有机基团主要有三类： 1、疏水基团，如不同键长的烷烃（C8和 C18）和苯基等； 2、极性基团，如丙氨基、氰气基、醚和醇等； 3.离子交换基团，如作为阴离子效换基团的胺基；季铵盐，作为阳离子效换基团的磺酸等。 制备键合固定相一般有如下几种途径： 1、用醇或胺与硅醇基反应，形成Si-O-C和Si-N-C类型的键； 2.用有机氯硅烷与硅醇基反应，