浅析1掌握紫外分光光度计的操作方法.pptVIP

1.掌握紫外分光光度计的操作方法。 2.掌握吸光系数法的定量方法。 3.掌握含量测定、标示量的百分含量及稀释度等计算方法。 实验十一 维生素B12注射液的含量测定 实验目的 * 维生素B12是一类含钴的卟啉类化合物，具有很强的生血作用，可用于治疗恶性贫血等疾病。维生素B12不是单一的一种化合物，共有七种。通常所说的维生素B12是指其中的氰钴素，为深红色吸湿性结晶，制成注射液的标示含量有每毫升含维生素B12 50、100或500mg等规格。 维生素B12的水溶液在278±1nm、361±1nm与550±1nm三波长处有最大吸收。361nm处的吸收峰干扰因素少，药典规定以361±1nm处吸收峰的比吸光系数E值（207）为测定注射液实际含量的依据。 实验原理 * 仪器与试剂 752型紫外-可见分光光度计，756型紫外可见分光光度计；石英比色皿；维生素B12注射液：100mg/ml；吸量管：5ml；容量瓶：10ml * 1.维生素B12最大吸收波长扫描 用756型紫外可见分光光度计对其进行扫描。 2.比色皿的校核 将两只石英比色皿编号标记，装入蒸馏水，在361nm处比较两只比色皿的透光率。以透光率最大的比色皿为100﹪透光，测定另一只比色皿的透光率，换算成吸光度作为它的校正值。测定溶液时，以那只透光率最大的比色皿作空白，另一只比色皿装待测溶液，测定的吸光度减去其校正值。 3.吸光系数法 精密吸取维生素B12注射液样品（100mg/ml）3.0ml，置于10ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，得样品稀释液。装入1cm石英比色皿中，以蒸馏水为空白，在361nm波长处测得吸光度A值，与48.31相乘，即得样品稀释液中每毫升含维生素B12的mg数。 实验步骤 * 数据处理 按照比吸光系数的定义，每100ml含1g维生素B12的溶液（1﹪）在361nm的吸光度应为207。即： E （361nm）＝207（100ml/g﹒cm） ＝207×10-4(ml /mg﹒cm ) C样 ＝ A样/b﹒E ＝ A样×48.31 (mg/ml) 维生素B12标示量（％）＝ ×100％ * 1.试比较用标准曲线法与吸光系数法定量的优缺点。 2.吸收系数法中为什么吸光度乘48.31 即得每毫升VB12 的μg 数？ 思考题 *