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Department of Microbiology, Harbin Medical University 第二十四章　分枝杆菌属及检验 微生物学教研室 杨学艺 分枝杆菌是一类细长略带弯曲的杆菌，含有分枝菌酸，有分枝生长的趋势 而得名。具有抗酸性，故又称抗酸杆菌。 人结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌对人类致病。人型结核分枝杆菌感染的发病率最高。 由于结核分枝杆菌的耐药和AIDS发病率呈上升趋势，结核病成为危胁人类健康的一个严重的全球性公共卫生问题。 教学大纲 掌握内容 结核分枝杆菌主要生物学性状；致病物质及致病机制；结核菌素试验原理及应用；微生物学检查法 了解内容 麻风分枝杆菌的形态染色特性、致病性及微生物学检查法 全世界有1/3人口，19亿人已感染结核分枝杆菌，15岁以下儿童感染者达1.8亿，每秒种就有一人感染，全球有2 000万活动性患者，新发病例 1 000万人，每年有300万人死于结核，死于结核的人数超过AIDS疾病、腹泻及热带病死亡人数的总和，是传染病死亡最多的。近年来AIDS的发病率上升，伴随结核病上升。我国解放前结核严重流行，发病率大于1%，有十痨九死之称，建国后人民生活水平提高，卫生条件的改善，抗痨药物的发现，特别是积极开展防痨工作，接种BCG，发病率和死亡率大大降低，但近年来有抬头趋势。 分枝杆菌属主要特点 是一类直或微弯曲、有分枝生长趋势的杆菌。无鞭毛、无芽胞、无荚膜 主要特点：细胞壁含有大量脂质，主要为分枝菌酸。 具有抗酸性，革兰染色阳性,但不易着色，常用抗酸染色。 专性需氧营养要求特殊，大多数生长缓慢。 不产内、外毒素和侵袭性酶等致病物质，所致疾病呈慢性。 分枝杆菌属种类 结核分枝杆菌 Mycobacterium tuberculosis Tubercle bacilli 流行病学 结核病的病原菌 1882年德国细菌学家郭霍（Koch） 证明 全球性卫生问题 是艾滋病高发区人群的首要死因 世界防治结核病日 3月24日 结核分枝杆菌－－形态染色 细长略弯，丝状或分枝生长 无芽孢，无鞭毛，无荚膜,无菌毛 革兰染色阳性，不易着色 抗酸染色阳性,菌体被染成红色 结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，大小1～4X0.4μm。牛分枝杆菌则比较粗短。分枝杆菌属的细菌细胞壁脂质含量较高，约占干重的60%，特别是有大量分枝菌酸(mycolic acid)包围在肽聚糖层的外面，可影响染料的穿入。分枝杆菌一般用齐尼（Ziehl- Neelsen)抗酸染色法，以5% 石炭酸复红加温染色后可以染上，但用3%盐酸乙醇不易脱色。若再加用美蓝复染，则分枝杆菌呈红色，而其他细菌和背景中的物质为蓝色。 结核分枝杆菌－－培养特性 生长条件： 专性需氧、在8%-12%的CO2环境中可刺激其生长。细胞内寄生菌、最适pH6.4～6.8、营养要求高、培养基含鸡蛋、马铃薯粉、甘油、孔雀绿等专性需氧。最适温度为37℃，低于30 ℃不生长。结核分枝杆菌细胞壁的脂质含量较高，影响营养物质的吸收，故生长缓慢。在一般培养基中每分裂1代需时18～24h，营养丰富时只需5h。 生长现象： ※生长缓慢（最快分裂速度为18小时一代） 所以初次分离一般2~4周 ※改良罗氏培养基菌落特征：干燥、米黄色，菌落粗糙，边缘不整齐， 质地较硬的R型菌落，形似菜花 ※液体培养基：形成菌膜，有毒株呈索状生长 初次分离需要营养丰富的培养基。常用的有罗氏（Lowenstein-Jensen）固体培养基，内含蛋黄、甘油、马铃薯、无机盐和孔雀绿等。孔雀绿可抑制杂菌生长，便于分离和长期培养。蛋黄含脂质生长因子，能刺激生长。根据接种菌多少，一般2～4周可见菌落生长。菌落呈颗粒、结节或花菜状，乳白色或米黄色，不透明。在液体培养基中可能由于接触营养面大，细菌生长较为迅速。一般1～2周即可生长。临床标本检查液体培养比固体培养的阳性率高数倍。 结核分枝杆菌－－生化反应 生化反应不活泼，不发酵糖类，耐热触酶试验－（非结核分枝杆菌＋） ； 人型结核分枝杆能合成烟酸，烟酸试验＋，硝酸盐还原+，烟酰胺酶试验+。脲酶试验＋，中性红试验+。 结核分枝杆菌不发酵糖类。与牛分枝杆菌的区别在于结核分枝杆菌可合成烟酸和还原硝酸盐，而牛分枝杆菌不能。热触酶试验对区别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌有重要意义。结核分枝杆菌大多数触酶试验阳性，而热触酶试验阴性; 非结核分枝杆菌则大多数两种试验均阳性。热触酶试验检查方法是将浓的细菌悬液置68 ℃水浴加温20min，然后再加H2O2。 观察是否产生气泡，有气泡者为阳性。 抵抗力 结核分枝杆菌细胞壁中含有脂质，故对乙醇敏感，在7