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重组人组织激肽释放酶结合蛋白的高密度毕赤酵母表达-药学学报
药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 13, 48 (7): 1107 1112 ·1107 ·
· 究论文·
组人组织激肽释放酶结合蛋白的高密度毕赤酵母
表达、纯化和生物学活性
倩, 邢永梅, 刘 嘉, 刁 勇*
(华侨大学生物医学学院, 华侨大学分子药物研究院, 福建 泉州 36202 1)
摘要: 研究重组人组织激肽释放酶结合蛋白 (rHKal) 的高密度毕赤酵母表达、纯化以及生物学活性。以质
粒pPIC9-Kal/GS115 (His4) 转化毕赤酵母细胞, 在7.5 L 培养罐内高密度细胞发酵, 以1%～2% 的甲醇诱导表达
rHKal 。发酵上清液经疏水层析、亲和层析和凝胶层析分离 rHKal 。通过 MTT 及小管形成实验评价 rHKal 对
HUVEC 的生物学活性。收获发酵上清液内rHKal 的表达水平为50 mg ·L 1, 纯化后rHKal 原液的纯度达98% 以
上。rHKal 对HUVEC 的增殖抑制活性呈剂量依赖性, 但对其小管形成抑制作用的量效关系呈U 型曲线。rHKal
具有新生血管形成抑制活性, 本研究为rHKal 的生产提供了有效方法。
关键词: 组织激肽释放酶结合蛋白; 高密度发酵; 纯化; 生物学活性
中图分类号: R963 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (20 13) 07- 1107-06
Expression of recombinant human kallistatin in Pichia p astoris by
high density cell culture, and its purification and characterization
*
ZHANG Qian, XING Yong-mei, LIU Jia, DIAO Yong
(School of Biomedical Science, Institutes of Molecular Medicine, Huaqiao University, Quanzhou 362021, China )
Abstract : Kallistatin (Kal) is a negative acute phase endogenous protein which can inhibit tumor angiogenesis,
growth and metastasis effectively. To express and purify recombinant human kallistatin (rHKal), and characterize
its biological activity, P. p astoris was transformed with pPIC9-Kal/GS 115 (His4) to express rHKal. The
fermentation was carried out in a 7.5 L bioreactor with high density cell culture. 1% 2% methanol was added
to the m
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