中药半夏单细胞悬浮培养胚胎发生及植株再生.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１２，３２（１０）：３９４９ 中药半夏单细胞悬浮培养、胚胎发生及植株再生 １ １ ２ １ １ ３ 欧巧明 　厚毅清 　包梅年 　胡　达 　陈玉梁 　岳春玲 （１甘肃省农科院生物技术研究所　兰州　７３００７０　２兰州理工大学生命科学与工程学院　兰州　７３００７０） （３兰州大学第一医院　兰州　７３００００） 摘要　以悬浮细胞作为靶标材料，在ＣＯＬＣ诱导获得多倍性细胞后，经诱导分化和再生形成纯合 的多倍体植株，是一条可行且高效的多倍体诱导途径。但该途径的前提是成熟、高效的单细胞悬 浮培养和植株再生体系建立。鉴于此，在获得优良胚性愈伤组织的基础上，对半夏细胞悬浮培 养、细胞分化及再生植株所涉及的关键问题及其影响因素进行研究，结果获得了以近圆形细胞为 ６ 主的高质量单细胞悬浮系，细胞生长曲线呈典型的“Ｓ”型，细胞密度可达２．０×１０以上，活细胞 率可达８６．８０％，近圆形细胞率可达８２．６４％；明确了其细胞胚胎发生的两种可能途径，并通过诱 导细胞分化，成功获得了愈伤组织增殖，最终实现了高效的植株再生，愈伤分化率可达９４．４６％， 丛生芽诱导率可达３３７．４２％，幼芽成苗率可达９０．７５％，幼苗生根率可达９５．４０％，移栽成活率可 达９８．８３％，从而建立了高效的半夏悬浮细胞培养和植株再生体系，为后续的基于单细胞水平的 半夏多倍体诱导研究提供技术参考和科学依据。 关键词　半夏（ＰｉｎｅｌｌｉａｔｅｒｎａｔａＢｒｉｅｔ．）　悬浮细胞　秋水仙碱　胚胎发生　植株再生　多倍体 中图分类号　Ｑ９４３．１ 　　半夏（ＰｉｎｅｌｌｉａｔｅｒｎａｔａＢｒｉｅｔ．）是天南星科半夏属多 诱导加倍获得多倍性细胞后，再经分化和再生，形成纯 年生草本植物，其干燥块茎为我国常见的传统中药，含 合的多倍体植株，完全可以避免基于整体分生组织的 ［１２］ 多倍体诱导产生嵌合体的缺点，可能是可行且高效的 有多种重要的药理学成分 。目前，半夏野生资源数 量逐渐减少，而半夏品种人工栽培仍难以保证其高繁 多倍体诱导途径。目前，半夏组织或细胞离体培养已 ［３］ 成为成熟技术，诸多研究者已先后对半夏组织及悬浮 殖系数和药材的高产优质 ，致使其成为紧缺的中 ［４］ 细胞培养进行了研究［１２，８１４］。然而上述途径的前提是 药材 。 　　药用植物多倍体通常表现出产量、抗逆性、药用成 必须建立成熟、高效的单细胞悬浮培养体系。鉴于此， ［５７］ 本研究率先于２００６年对此进行了探索研究，并已针对 分含量提高等特征 。采用细胞培养和多倍体诱导 技术，人工诱导和选育药用半夏纯合多倍体是一条有 甘肃西河半夏进行了其悬浮细胞培养与植株再生的初 ［１５］ 望缓解上述问题的有效途径。然而这种基于整体分生 步研究，但未达到高效的目标 。但鉴于半夏遗传背 组织的多倍体诱导方法极易产生嵌合体，且后期筛选 景复杂，特别是甘肃西河半夏的地域特色，而相关研究 难度大以及可能发生回复突变仍然是其多倍体诱导的 又缺乏足够的借鉴性。而半夏细胞悬浮培养过程中多 主要难点。倘若以悬浮单细胞作为靶标材料，经ＣＯＬＣ 存在悬浮细胞污染严重、胚性细胞诱导率和分裂细胞 率较低等问题，特别是基于单细胞的诱导分化和植株 收稿日期：２０１２０５１６