星突江鲽胰岛素样生长因子i的体外重组表达及生物-中国工程科学.pdf

星突江鲽胰岛素样生长因子I的 体外重组表达及生物活性分析 1 1，2 1 1 1，2 徐永江 ，臧 坤 ，柳学周 ，史 宝 ，陈圣毅 （1. 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室，中国水产科学研究院黄海水产研究所，山东青岛266071 ； 2. 上海海洋大学水产与生命学院，上海201306 ） [摘要] 为了在蛋白水平认识星突江鲽（Platichthys stellatus ）胰岛素样生长因子I （IGF-I ）的生长调控作用 及机制，采用RT-PCR 方法扩增了其成熟肽片段，利用原核表达载体pET-28a 成功构建了重组星突江鲽IGF- I/pET-28a 质粒，转化至大肠杆菌BL21 （DE3）后经IPTG 诱导获得了N 端含6 个组氨酸的重组星突江鲽IGF- I 蛋白。获得的重组IGF-I 蛋白大小为12.1 kD ，37 ℃下用0.5 mmol/L 的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱 导3 h 时目的蛋白表达量最高，占菌体总蛋白的39.8 % ，主要以包涵体形式存在。Western blotting 免疫印迹 表明星突江鲽IGF-I 重组蛋白均可被6×His抗体特异性识别。包涵体经6 mol/L 盐酸胍变性、Ni2+离子亲和 柱纯化和尿素梯度复性后，可获得高纯度的IGF-I 重组蛋白。细胞增殖试验结果显示0.6 μg/mL 的星突江 鲽IGF-I 重组蛋白能显著促进人胚胎肾细胞HEK293T 的增殖而大于1.8 μg/mL 时则表现出抑制作用。本 研究成功构建了星突江鲽IGF-I 体外高效表达系统，并获得具有细胞水平生物活性的星突江鲽IGF-I 重组 蛋白，结果可为深入探究IGF-I 在星突江鲽生长发育中的作用机制及研制高效绿色的促生长制剂提供基础 资料。 [关键词] 星突江鲽；胰岛素样生长因子I ；原核表达；生物活性 [中图分类号] S96 [文献标识码] A [文章编号] 1009-1742（2015 ）01-0067-07 IGF-I 的体外重组表达，并通过细胞增殖诱导试验证 1 前言 明了所获得IGF-I 重组蛋白的生物活性。近期 [14] 鱼类生长激素-胰岛素样生长因子（GH-IGFs ） Li 等 首次在毕赤酵母中实现了斜带石斑鱼IGF-I 轴在生长调控中起着非常重要的生理作用。IGF-I 的重组蛋白表达，为鱼类IGF-I 进一步在养殖中的 是重要的GH 下游调控因子，注射GH 可显著提高鱼 开发应用奠定了基础。 [1，2] 类肝脏中IGF-I mRNA表达量和血浆IGF-I浓度 。血 星突江鲽（Platichthys stellatus ）属鲽形目（Pleu- 浆IGF-I 浓度与鱼类生长速度表现出较高相关性， ronectiformes ）、鲽科 （Pleuronectidae ）、江鲽属 [3] Picha 等 已将其作为指示鱼类生长的指标之一。此 （Platichthys ），分布于我国、日本、俄罗斯、加拿大及 [4] [5 ，6] [7] 外，IGF-I 在鱼类生殖 、早期发育 、免疫应答 和 美国太平洋沿岸，是一种具有较高经济价值的鲆鲽 [8] 渗透压调节 等方面均发挥重要作用。目前，研究 类鱼种，具有营养丰富、经济价值高、广温广盐、耐 [9]