雌激素在大鼠杏仁核及纹状体多巴胺代谢中作用差异.docVIP

雌激素在大鼠杏仁核及纹状体多巴胺代谢中作用差异 　　　摘要：为探讨雌激素对大鼠杏仁核(amygdala, Amy)与纹状体 (striatum, Str)多巴胺(dopamine, DA)代谢的作用,本实验采用离体电化学检测技术高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)测定正常雌鼠及经雌激素处理的去卵巢(ovariectomy, oVX)雌鼠Amy和Str的DA及其代谢产物的组织含量。实验结果显示, OVX雌鼠经雌激素处理后, 可引起Amy的DA及其代谢产物含量减少, 而Str的DA及其代谢产物含量不受其。OVX雌鼠Amy的DA更新率低于正常及雌激素处理的OVX鼠, amy组织的DA含量约是Str组织的1/6, 而更新率是Str的2倍左右。以上结果提示, 雌性大鼠血清雌激素浓度可影响其Amy组织的DA代谢及组织含量, 而Str的DA组织含量不因雌激素浓度的改变而变化。大量表明, 雌鼠纹状体的多巴胺(dopamine, DA)释放量、含量, 以及DA受体密度和亲和力等有着动情周期依赖性变化,而雌激素作为雌鼠体内的主要性激素是引起这种动情周期依赖效应的主要原因。近年来, 许多学者认为中脑边缘系统的DA通路在DA功能中的作用不容忽视。其中, 杏仁核(amygdala, amy)在神经退行性疾病帕金森病(Parkinson′s disease, PD)发病过程中的严重受累[1], 使得人们更加重视对中脑边缘系统 DA能神经通路的研究。 本室以前的工作表明, 电刺激腹侧被盖区诱发杏仁核的DA释放具有性别差异, 雌鼠明显高于雄鼠[2],而电刺激内侧前脑束诱发纹状体(striatum, Str)的DA释放未发现性别差异(待发表资料)。由此我们认为杏仁核在PD发病率显示明显性别差异[3]的现象中有着重要的作用。本研究在前期工作的基础上,通过采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC), 在去卵巢(ovariectomy, OVX)大鼠及雌激素处理大鼠身上探讨雌激素对Amy以及Str的DA含量的影响,以期能更好地解释临床常见的运动紊乱综合症如PD发病率的性别差异, 以及雌激素在Amy和Str组织中的作用。 毕业论文 　　1材料和 　　1.1实验动物、 用药及分组实验选用体重为200~300 g的成年雌性Wistar大鼠, 置于室温19±2℃, 24 h昼夜循环光照条件下生活, 自由饮水、进食。动物于实验前适应实验室环境1周。实验用药苯甲酸雌二醇(estradiol benzoate, EB)由上海第九制药厂生产, 用芝麻油稀释, 终浓度为5、10 μg/0.1 ml。 　　实验共分六组, 分别为(1)正常对照组; (2)OVX组; (3) 5 μg EB剂量组; (4)10 μg EB剂量组; (5)20 μg EB(即10 μg eB, 2次/d)剂量组; (6) 替代剂芝麻油(oil)组。正常对照组大鼠在实验前至少10 d接受去卵巢假手术, 其它各组大鼠需在实验前至少10 d接受去卵巢手术, 并根据不同实验要求皮下注射EB或oil 3 d 。 　　1.2 卵巢摘除术方法将雌鼠麻醉后, 在腰背部中央剪开皮肤, 切口约2～3 cm, 令动物一侧卧, 在最末肋骨下约1 cm, 沿脊柱旁切开肌肉, 打开腹腔,结扎并切除卵巢, 观察切口处无出血后关腹; 再令动物侧向另一侧, 以同样的方法取出另一侧卵巢。amp;nb sp; 　　1.3 脑组织处理去卵巢雌鼠经雌激素处理3 d后, 将大鼠断头, 参照Paxinos和Watson[4] 鼠脑立体定位图谱, 在冰台上迅速取出Amy和Str组织,将各组织准确称重, 加入样品预处理A液(即0.4 mol/L高氯酸溶液)后将组织匀浆, 经12000 r/min离心20 min, 取上清液加入预处理B 液(mmol/L:柠檬酸钾 20、 磷酸氢二钾 300、乙二胺四乙酸二钠 2), 再经12000 r/min离心20 min后, 取上清液置于－80℃低温冰箱贮存,待行色谱测定各样品组织的DA、 DOPAC和HVA的含量。 毕业论文 　　1.4 高效液相色谱测定实验日本岛津公司6 A系列高效液相色谱仪。流动相含(mmol/L): 柠檬酸63.5、 柠檬酸三钠 61、 乙二胺四乙酸二钠0.1、八烷基磺酸钠0.65和10%甲醇, pH 4.3, 流速1.2 ml/min, 设定工作电压0.8 V。取样品20 μl进样, 检测各样品DA、 DOPAC及HVA含量。实验用主要试剂DA、 dOPAC和HVA均为美国Sigma公司产品。 　　1.5 统计学处理各组数据均用mean±