靶向遗传印记基因PEG10siRNA真核表达载体构建及鉴定.docVIP

靶向遗传印记基因PEG10siRNA真核表达载体构建及鉴定 　 作者：黄锦，林菊生，常莹，周秀敏　 【摘要】 目的 构建并鉴定针对遗传印记基因PEG10的siRNA真核表达载体。方法 根据PEG10基因cDNA序列，设计针对目的基因的4个siRNA靶序列，将其插入H1启动子下游，克隆到真核表达载体psiRNAhH1neo中，通过酶切鉴定和DNA测序鉴定。结果 酶切鉴定及DNA测序结果显示插入片断正确。结论 本研究成功构建针对PEG10的真核表达载体，可能成为肝癌基因治疗中的一种新型、高效的治疗载体。 【关键词】 遗传印记基因；PEG10；siRNA；真核表达载体；鉴定 原发性肝细胞癌基因治疗面临的一大难题，是寻找参与绝大多数肝癌发病关键性的特异分子靶。PEG10（Paternally expressed gene 10）是2001年Ryuichi Ono等用cDNA微阵列在肝细胞癌组织中发现的一个新的遗传印记基因，它在肝癌中表达的特异性提示可能参与肿瘤细胞生长失控[1]。本研究采用分子克隆技术，构建了针对PEG10的siRNA真核表达载体，通过酶切鉴定和测序鉴定鉴定其结构。 1 材料与方法 1.1 材料 质粒psiRNAhH1neo购自美国InvivoGen公司，受体菌E.coli DH5α由本实验室保存。限制性内切酶BbsⅠ和AseⅠ及T4DNA连接酶购自美国NEB