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124 广东农业科学 2014 年第 17 期 LR 型微囊藻毒素对鲢鱼 PEPCK 基因表达的影响 徐育强 张开岳 张 勇 蒋骄云 冯 龙 许世杰 曲宪成 上海海洋大学水产与生命学院袁 上海 201306冤 要 在前期经 LR 型微囊藻毒素 MC -LR冤 处理后建立鲢鱼肝脏组织抑制差减杂交文库的基础上袁 利用 RACE 方法克隆了经 MC-LR 处理后差异表达明显的鲢鱼磷酸烯醇式丙酮酸 激酶 PEPCK 基因c DNA 全长袁并对其 进行了序列分析袁然后通过半定量分析了经 MC-LR 投与 1尧5尧10 h 鲢鱼肝脏组织 PEPCK 表达水平遥 结果显示院鲢鱼 PEPCK 基因c DNA 全长 2 605 bp 袁 包括 101 bp 的5 端非翻译区尧564 bp 的3 端非翻译区尧1 911 bp 的开放阅读框袁 编码 636 氨基酸遥 将鲢鱼 PEPCK 基因cDNA 核酸及氨基酸序列与GenBank 中已发表的其他几种鱼类的相应序列 进行比对袁表明鲢鱼 PEPCK 与翘嘴红鲌的同源性最高袁其核酸及氨基酸序列的相似性分别达到 97%和 99% 曰其次为 斑马鱼袁同源性均达到 90% 以上曰与星斑川鲽的同源性最差袁但核酸及氨基酸序列的相似性也分别达到 77%和 84% 袁 说明鱼类 PEPCK 在长期的进化过程中具有很高的保守性遥 鲢鱼 PEPCK 具有与草酰乙酯结合的特有结构域以及与 GTP 三磷酸链结合的激酶 1 和激酶 2 基序遥 另外袁鲢鱼投予 MC-LR 后袁肝脏组织 PEPCK 经过 1尧5尧10 h 的表达量均 有显著升高袁说明鲢鱼投予 MC-LR 1 h 内该基因即被诱导表达袁且在 10 h 内皆维持较高的表达水平遥 这与微囊藻毒 素作用有关袁推测与微囊藻毒素解毒过程相关遥 关键词 磷酸烯醇式丙酮酸 激酶曰 抑制差减杂交曰 快速扩增 cDNA 末端曰 LR 型微囊藻毒素 中图分类号 Q786 文献标识码 A 文章编号 1004-874X 2014冤17-0124-05 MC-LR effects on the expression of PEPCK genes in the silver carp XU Yu-qiang, ZHANG Kai-yue, ZHANG Yong, J IANG Jiao-yun, FENG Long, XU Shi-j ie, QU Xian-cheng (Colle ge of Fis he ries and Life Sc ie nc es , Shanghai Oce an Univ e rs ity , Shanghai 201306, China) A bstract: In the present study , RAC E was performed to clone the silver carp PEPCK c DNA and the sequence was analyzed. Under the previous work of construction of the silver carp, liver cDNA suppression subtractive hybridization libraries exposed to MC -LR. T hen, semi -quantitative RT -RCR was used to analyze the transcriptional expression of t