黑籽重楼种内形态标记及ISSR标记遗传分化探究.doc

黑籽重楼种内形态标记及ISSR标记遗传分化探究 　 作者：陈照， 叶睿超， 张瑞， 李伟阳， 王丽 【摘要】 　　该文对黑籽重楼Paris thibetica种内两变种——黑籽重楼原变种Paris thibetica var. thibetica与无瓣黑籽重楼Paris thibetica var. apetala在形态学及ISSR分子标记上的差异进行了研究和比较。形态特征分析表明黑籽重楼原变种与无瓣黑籽重楼在萼片长宽、花药数、花丝长等7个花器官性状方面有显著差异，但通过在主成分分析图上不能明显区分两个变种，两变种总体形态上的分化不明显。ISSR分析上，从100个ISSR引物中筛选出8个引物，在300～1500 bp间共 扩增出 36条带，其中黑籽重楼原变种特征带有5条，无瓣黑籽重楼扩特征带有8条。 【关键词】 黑籽重楼 变种 形态差异 ISSR 　　Abstract:The morphological differentiation analysis on Paris thibetica var. thibetica and Paris thibetica var. apetala was accomplished to indicate that the morphological differentiation between those two varieties were not significant , while the differentiations of the floral organs were significant. Generally, Paris thibetica var. thibetica and Paris thibetica var. apetala could not be classified by principal component analysis. In ISSR analysis, 8 proper primers were selected from 100 ISSR primers. And 36 bands were amplified by ISSR-PCR, of which length range was 300bp to 1500bp. Paris thibetica var. thibetica had 5 characteristic bands, while Paris thibetica var. apetala had 8. 　　Key words:Paris thibetica; variety; Morphological differentiation; ISSR 　　重楼是延龄草科(Trilliaceae)重楼属(Paris L.)植物的统称，是一类极具药用价值的植物。《神农本草经》《本草纲目》《植物名实图考》及《中国药典》等都有所记载［1］，常用于治疗疔疮肿毒以及流行性腮腺炎等疾病。由于它还有抗癌止血，祛痰抑制细菌等功效［1］，现在是云南白药等许多中成药的主要成分［2］。 在李恒系统中，重楼属植物有24种，由于其形态变异较大，在种间、种内又有交叉重叠，这对于其形态分类及种质资源利用造成一定困难［3］。历年的《中国药典》只收载了滇重楼和华重楼2个种，实际上在民间除了少数稀有种外，几乎所有重楼属植物均能入药［3］。 　　黑籽重楼（Paris thibetica）主要分布于西藏南部、云南西北部至西部, 四川西半部至峨眉山、甘肃南部、锡金、不丹也有。其下有黑籽重楼原变种(P. thibetica var. thibetica) 与无瓣黑籽重楼(P. thibetica var. apetala) 两个变种［1］。研究表明黑籽重楼有明显的镇静作用［4］，其富含的偏诺皂苷，是重楼的主要药效成分［1］。在滇重楼等利用过度的情况下［5］，对黑籽重楼进行种内分化和遗传多样性等研究，使其充分的了解种质资源，显得迫切并有必要。 　　传统的形态标记是遗传标记的基础［6］，是检测遗传多样性和区分种属间差别最直接的方法。但形态特征的变异除与自身遗传基础的变异相关外，还与其所处的环境等因素相关，是对基因的间接反映，并且形态标记的结果在缺乏严密的生物统计学分析下，结论往往不够完善。随着分子生物学的发展，DNA分子标记由于具有直接分析遗传物质，与基因表达无关，信息量大和所需样品量小等优点，目前被普遍认为是评判遗传结构最好的方法。简单重复序列间标记(Inter-simple Sequence Repeat，ISSR)是一种基于微卫星序列发展起来的分子标记［7］, 具有简便、多态性高, 稳定性和重复性好等优点，在分类学、种系发生学、保护生物学和种群遗传学