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AIDS实验诊断 　 【关键词】 获得性免疫缺陷综合征；人类免疫缺陷病毒；实验室技术和方法 　　获得性免疫缺陷综合征（Acquired Immunodeficiency Syndrome）又称艾滋病（AIDS），已成为危害全球的一种严重传染性疾病，是由人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV）引起的。艾滋病在我国的流行已经进入快速增长期，预防和控制艾滋病已经刻不容缓［1］。因此对HIV抗原抗体的检测，尽早发现感染者控制其传播是非常重要的。目前临床检测内容主要有P24抗原、HIV抗体、HIV病毒载量和CD4+T淋巴细胞计数等。现就HIV的实验诊断方法作如下简述。 　　1 HIV的结构特点 　　HIV呈球形或卵形，直径90～130nm，包膜由病毒特有的蛋白质附着于一薄层类脂质构成。其核心含有两条相同拷贝的RNA链，其外周是由多种蛋白质形成的核膜。HIV同其它逆转录病毒一样，基因组中存在三个大的开放读框，其顺序是gag-pol-env。Gag基因编码55KD的前体蛋白，在病毒成熟过程中，被pol基因编码的蛋白酶加工，分别产生核心蛋白P17、核壳蛋白P24和核酸结合蛋白P15。P24是核壳组成蛋白，构成病毒的核衣壳，它的结构比较稳定，是HIV-1型的特异性蛋白。在HIV-2与P24对应的是主要核心抗原P32，为HIV-2型病毒感染的特异标志。Env编码包膜蛋白，由外膜糖蛋白gp120和跨膜糖蛋白gp41组成（在HIV-2型病毒中与之相当的是gp110/130和gp36）［2］。 　　2 HIV抗原检测 　　在感染早期，HIV抗体尚未出现，而血Ｐ24抗原常以低水平出现，因此检测P24抗原可作为早期特异性诊断；该抗原检出率远比HIV抗体为低，因为HIV抗原出现不久即可产生抗体，抗原抗体以复合物形式存在，而游离很少，抗原在感染后期再度升高作为HIV活动性感染的标志。因此，P24抗原检测主要作为HIV抗体检测“窗口期”的诊断，同时对监测病程进展和预后判断、判定新生儿感染母婴垂直传播可能性、疗效评价、评价新疫苗、艾滋病的研究等方面有重要意义［3］。 　　P24抗原检测方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫（RIA）、免疫荧光技术（IFA）、免疫吸附电镜（ISEM）等，其中ELISA最为敏感。其原理是用已知抗体包被固相载体，加入待测血清，若血清中含有P24抗原则与抗体结合形成复合物，再加入酶标记抗体与抗原结合，加底物显色，在酶标仪读取结果。此法易受干扰物质影响产生假阳性，因此需用综合实验加以鉴别。由于HIV感染早期P24抗原量很少且病情发展过程中抗原抗体形成复合物阻碍P24抗原检出，另外，方法灵敏度不高也影响检出率。 　　新技术的应用，提高了P24抗原检出率，主要有：①免疫复合物裂解检测法（ICD），利用弱酸可使免疫复合物解离，增加P24抗原浓度，从而提高阳性检出率，其敏感性90%［4］。但不宜单独使用，可用于细胞培养中HIV测定，抗HIV药物疗效测定，或急性HIV感染检测时替代HIV-RNA检测。②超敏感酶免疫测定法（UEI），又称双位点免疫复合物转移酶免疫测定，基本原理是利用高亲和力抗体浓缩富集Ｐ24抗原进行检测。此法对试剂仪器要求较高，操作复杂。③ISEM，将抗原抗体的特异性与电子显微镜的高分辨率相结合，对病毒颗粒直接特异性检测。此法灵敏度高，需精密仪器，操作复杂。④线性免疫酶测定（LIA）和Cobas core HIV Combi EIA属新近发展起来的第四代HIV检测技术［5］。 　　3 HIV抗体检测 　　3.1 ELISA ELISA作为HIV抗体初筛最常用的检测方法，其实验用试剂在经历了第1代、第2代、第3代后，已经发展到第4代［6，7］。1985年美国FDA批准使用的第1代ELISA检测试剂，主要是以病毒裂解物或部分纯化的病毒抗原包被反应板，由于含有宿主细胞成分的污染和杂蛋白的存在，故假阳性率较高。1990年第2代试剂使用了基因工程的重组或人工合成多肽HIV抗原包被反应板，抗原组成一般包括P24、gp36、gp41、gp120能同时检测HIV-1、HIV-2型，其特异性较第1代试剂有了很大的提高。1992年美国研制出第3代试剂，使用双抗原夹心法检测抗体，相对第2代试剂敏感性有所提高，由于其检测亚型包括HIV-1、HIV-2和HIV-1型的O亚型，并且同时能检出IgM抗体，因此窗口期由10周可以缩短至3～4周。为避免窗口期传染，荷兰、法国等国已研制出第4代试剂，于1998年在欧洲注册使用。它是在第３代的基础上进一步增加了P24抗原的检测。同时进行HIV抗体及P24抗原的检测，可以提高试剂敏感性，缩短窗口期，一般为4～14天左右，减少急性感染者窗口期漏检［8］。据文献