bFGF对拟血管性痴呆小鼠学习记忆及海马5HT及DA影响.doc

bFGF对拟血管性痴呆小鼠学习记忆及海马5HT及DA影响 　 作者：曲娴 李春颖 苏畅 李冰 【摘要】 目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对拟血管性痴呆（VD）小鼠学习记忆的影响及其机制。方法 清醒小鼠反复脑缺血再灌注法建立VD动物模型；造模后给予bFGF干预治疗；采用跳台法、避暗法及Morris水迷宫检测小鼠的学习记忆能力，用荧光分光光度法检测脑组织5羟色胺(5HT)和多巴胺(DA)含量，HE染色观察病理形态学变化。结果 bFGF组小鼠学习记忆能力提高(P＜0.01)；海马5HT和DA含量增加(P＜0.05，P＜0.01)。结论 bFGF通过调节脑神经递质5HT和DA含量改善拟VD小鼠学习记忆能力。 【关键词】 碱性成纤维细胞生长因子；血管性痴呆；学习记忆；5羟色胺；多巴胺 　　有研究认为65岁以上的脑卒中幸存者中，大约1／3于发病后3个月内出现血管性痴呆（VD）〔1〕。在我国，VD可能是老年期痴呆中最常见的形式〔2〕。但其发病的确切病理机制尚不明了，临床干预手段缺乏特异性〔3〕。碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）是神经营养因子的一种，对神经元的存活、生长发育、分化、再生和功能维持具有不可替代的调节作用〔4〕。大量的研究已肯定其对神经保护的作用〔5，6〕。而bFGF对VD引起的单胺类递质改变的研究未见报道。为此，本实验在制备VD模型小鼠的基础上采用bFGF进行干预治疗，并检测VD小鼠学习记忆能力、海马5羟色胺(5HT)和多巴胺(DA)含量，旨在探讨bFGF治疗VD的可能机制，为临床治疗提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物与试剂 　　昆明种小鼠，体重（30.0±3.12）g，雌雄兼用，由长春高新区医学实验动物研究中心提供，合格证号：SCXK（吉）20072008。bFGF注射液由Peprotech提供。DA、5HT均由Sigma公司提供。 　　1.2 动物模型制备及治疗方法 　　将动物随机分为正常组、假手术组、VD模型组（简称“模型组”），bFGF干预组（简称“bFGF组”）。参照文献采用清醒小鼠反复脑缺血再灌注法建立VD动物模型〔7〕。清醒小鼠仰位固定，行颈部切口，分离双侧颈总动脉，穿线备用。模型组和bFGF组固定拉紧丝线阻断血流，10 min后松线使血液再灌注20 min，如此反复3次。假手术组只分离双侧颈总动脉，套丝线扣，但不阻断血流。术后每日肌注青霉素0.2万U，连续3 d。bFGF组给予bFGF 100 μg/kg溶于生理盐水腹腔注射，于手术后首次即刻给药，以后每日1次，连用7 d〔8〕。正常组、假手术组、模型组给予等体积生理盐水腹腔注射，每日1次，连续注射7 d。 　　1.3 跳台实验 　　小鼠置跳台仪中，适应环境3 min后，底部栅板通电，记录小鼠跳上平台的时间（反应期）和5 min内小鼠遭受的电击数（错误次数）作为学习成绩；24 h后将小鼠放于平台上，底部栅板通电，记录小鼠跳下平台的时间（潜伏期）及5 min内的错误次数，作为记忆成绩。电压36 V，反应期、潜伏期指标以秒（s）为单位。测验时若小鼠停留在台上超出5 min，将其取下放入箱内，尾对平台，给予电刺激，记录潜伏期。 　　1.4 避暗法 　　将小鼠放入明室中，在箱内自由活动3 min。3 min内不进入暗室者剔除（预选时不通电）。1 h后正式进行学习训练，记录小鼠进入暗室遭受电击所需时间为潜伏期，并记录5 min内遭电击次数（错误次数）作为学习成绩；24 h后重复上述过程，记录潜伏期和错误次数作为记忆成绩。电压为36 V，潜伏期指标以秒（s）为单位。 　　1.5 Morris水迷宫实验 　　1 w后进行Morris水迷宫实验测试。采用Morris水迷宫图像分析系统，在直径80 cm圆形水池中设一低于水面1 cm透明站台，水温（25±2）℃，行为测试在安静环境内进行6 d。前5 d进行定位航行实验，将小鼠从东、南、西、北4个入水点背对站台轻轻放入水池，同时开始记录小鼠自入水到找到平台所需时间即逃避到平台上的潜伏期，每次间隔30 s。4次潜伏期时间的平均值作为当日最终潜伏期时间作最后统计。如果小鼠在120 s内未找到平台，其潜伏期按120 s计算。第6天进行空间探索实验，将水迷宫中的平台撤出，小鼠从平台的对角线处放入，记录小鼠在平台所在象限的时间即穿越有效区的时间和120 s内穿越平台的次数。 　　1.6 5HT和DA的检测 　　将小鼠迅速断头、取脑，放入预先冰冷的生理盐水中，去除脑膜和血管，分出海马，称重后加入预先冰冷的加入少量酸化正丁醇的玻璃匀浆器中，研磨制成匀浆，4℃ 3 000 r/min离心15 min，取上清，用荧光分光光度法测5H