P21、P53、PCNA在膀胱癌中表达及意义.docVIP

P21、P53、PCNA在膀胱癌中表达及意义 　　膀胱癌是泌尿系中最常见的一种恶性肿瘤。单个癌基因蛋白产物或抗癌基因蛋白产物与膀胱癌发生的相关性研究已有报道，而有关同一浸润性膀胱癌标本多个癌基因蛋白产物或抗癌基因蛋白产物表达规律的研究报道较少。作者用免疫组化方法检测浸润性膀胱癌中P21、P53、PCNA的表达水平，以探讨膀胱癌发病机制，找出癌基因蛋白产物、抗癌基因蛋白产物和PCNA表达与膀胱癌生物学行为的关系。 　　1 材料与方法 　　1.1 标本来源 　　收集本院1996年1月至2006年12月手术切除的膀胱癌标本29份，石蜡包埋，常规切片，经病理确诊为移行上皮癌［１］，其中高分化（I级，II级）13例，低分化（Ⅲ级，Ⅳ级）16例。另取前列腺增生患者正常膀胱黏膜5份。 　　1.2 试剂 　　P21、P53、PCNA单克降抗体为丹表DAKO公司产品。生物素化马抗鼠IgG及ABC试剂为美国VecterLabs产品，胰蛋白酶为丹麦DAKO产品。 　　1.3 方法 　　（1）切片经脱蜡，梯度酒精水化加P21，P53或PCNA（1：50）单抗，60min后4℃过夜；（2）加生物素化与抗鼠IgG（1：200）30min；（3）加ABC试剂（1：100）60min；（4）0.4%D-NA-H2O2中显色5min；（5）苏木素复染，酒精脱水，二甲苯透明树胶封片。以TBS缓冲液替代单抗作对照染色。