siRNA介导RNAi降低了CD59对补体溶破抵抗作用.docVIP

siRNA介导RNAi降低了CD59对补体溶破抵抗作用 　作者：石学香, 高美华*, 李先平, 张蓓, 王秋波 【摘要】 　　目的: 构建针对人CD59基因的siRNA表达载体并筛选稳定细胞系, 观察CD59基因改变后对补体溶破的抵抗作用的变化, 探讨CD59在肿瘤细胞免疫逃逸及相关信号转导通路中的作用。方法: 应用siRNA表达载体介导的RNAi技术, 构建含特异性CD59基因的重组载体, 脂质体法转染A2780细胞, G418筛选建立稳定抑制的细胞克隆, RTPCR和Western blot检测转染细胞中CD59基因的表达抑制效果, 染料释放试验判断CD59基因抑制后对补体溶破的抵抗作用的影响。结果: 重组载体经PCR及限制性内切酶酶切鉴定初步成功后送测序, 结果表明序列正确; 重组载体转染A2780细胞, 可表达绿色荧光蛋白, 经G418筛选, 得到抗性细胞克隆, RTPCR和Western blot表明, 稳定转染后CD59基因的mRNA和蛋白水平降低, 染料释放试验表明CD59基因受抑制后对补体溶破的抵抗作用降低。结论: 特异性沉默CD59基因的siRNA表达载体以及稳定抑制的细胞系构建和筛选成功, CD59基因抑制后对补体溶破的抵抗作用降低, 为后续进行肿瘤细胞的研究奠定了基础。 【关键词】 shRNA; CD59; A2780; 补体 　　［