- 1、本文档共13页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
IL10对大鼠原代肝细胞增殖影响
IL10对大鼠原代肝细胞增殖影响
作者:林羡屏, 黄月红, 郑伟达, 陈运新, 陈治新, 王小众
【摘要】 目的: 探讨IL10对体外培养大鼠原代肝细胞增殖的影响。方法: 胶原蛋白酶原位灌流法分离大鼠肝细胞, RTPCR法检测肝内不同细胞标志基因的表达情况, 对比原代肝细胞与大鼠正常肝组织的检测结果, 进行细胞纯度鉴定; RTPCR法检测原代肝细胞IL10和IL10受体α(IL10Rα)的表达情况; 原代肝细胞分3组培养: 正常组(N组)、 对照组(C组)和IL10干预组(I组); 通过MTT分析、 台盼兰细胞计数以及流式细胞术检测DNA含量等方法, 了解外源性IL10对肝细胞增殖的影响。结果: 细胞鉴定结果显示, 所有的标志基因在肝组织都可检测到有较高的表达, 原代肝细胞虽高表达肝细胞标志基因, 而肝内其他细胞的标志基因则不表达或低表达。RTPCR检测显示原代肝细胞可表达IL10和IL10Rα。台盼兰细胞计数提示IL10干预48 h, I组平均细胞数仅为C组的71.96%(Plt;0.05); MTT检测亦显示IL10干预24、 48 h, I组吸光度值分别为C组的88.41%与90.24%(Plt;0.05); 流式细胞术检测结果表明IL10干预24 h, I组肝细胞峰DNA含量是C组的59.06%, I组较C组降低(Plt;0.01), 甚至低于N组(Plt;0.01)。结论: 分离的原代肝细胞纯度较高, 大鼠原代肝细胞表达IL10/IL10R mRNA, IL10抑制大鼠原代肝细胞增殖。
【关键词】 原代肝细胞; IL10; IL10R; 细胞增殖
白细胞介素10(interleukin10, IL10)是一种抑制性细胞因子, 具有抗炎症作用, IL10受体α(IL10Rα)介导IL10参与各种各样的效应。IL10对治疗许多肝脏疾病如肝纤维化, 有着良好的应用前景, 动物模型实验已证实外源性IL10具有减轻肝脏炎症损伤和肝纤维化的作用[1-3]。IL10与肝纤维化相关研究的对象, 主要是放在HSC、 KC等细胞, 对肝细胞的研究相对较少; 部分学者从组织学、 血清学水平研究IL10对肝细胞的作用, 针对性不足, 要阐明作用机制还远远不够。基于以往对大鼠原代HSC和肝纤维化的研究[3], 我们将分离大鼠原代肝细胞, 检测大鼠原代肝细胞IL10/IL10RαmRNA的表达, 流式细胞术检测及MTT实验等方法研究IL10对肝细胞增殖的影响。
1 材料和方法
1.1 材料 SD大鼠(4只, 雄性, 重250~300 g), 购自上海实验动物中心; 重组大鼠IL10(深圳晶美生物工程公司), IV型胶原酶(Sigma公司), DMEM培养基干粉购自Gibco公司, 小牛血清购自杭州四季青公司, 细胞周期试剂盒购自北京天来生物医学科技有限公司, MTT购自Fluka公司, 台盼兰购自上海捷倍思基因技术有限公司。RNA抽提试剂盒(美国Gentra公司); AMV逆转录试剂盒由(美国Promega公司); IL10/IL10Rα引物及相应PCR试剂盒(TaKaRa公司); 其余引物(生工生物工程公司), 相应PCR试剂盒(美国Promega公司); 流式细胞仪(COULTER EPICSXL, Backman公司)。
1.2 方法
1.2.1 肝细胞的分离、 鉴定、 培养和冻存 取正常SD大鼠, 采用胶原蛋白酶原位灌流法分离出肝细胞, 具体操作方法见参考文献[4], PAS染色鉴定显示肝细胞纯度, 台盼兰拒染法计数活细胞比例, 按常规细胞冻存方法, 冻存肝细胞于液氮罐中备用[5], 使用前培养于含10 mL/L胎牛血清的DMEM培养液中。
1.2.2 原代肝细胞鉴定 分离得到的原代肝细胞以及新鲜肝组织块, 抽提总RNA, RTPCR法检测肝细胞和肝内其他主要细胞的标志基因表达, 相鉴别的细胞和相应的鉴别标志基因如下, 肝细胞白蛋白、 甲胎蛋白(AFP)和细胞色素P450基因CYP2B1和CYP2B2; 胆管细胞CD19, 内皮细胞CD31, Kupffer细胞CD68[6, 7], 肝内产胶原细胞如星状细胞前胶原酶I(preCollagenI, PCI)。抽提细胞总RNA、 逆转录、 PCR、 凝胶电泳成像的方法步骤参考[8]; 此外结合原代肝细胞PAS染色观察糖原颗粒, 辅助鉴别。引物序列: Albumin: F: 5′TTGCCAAGTACATGTGTGAG3′; R: 5′GGTTCTTCTACAAGAGGCTG3′; 373 bp. CK19: F:
您可能关注的文档
- ASAⅡ~Ⅲ级老年性痔微创治疗疗效观察及评价.doc
- ASIK矫正RK后近视临床观察.doc
- Axin蛋白表达及肝细胞癌发生及预后关系探究.doc
- A型肉毒毒素治疗痉挛性小儿脑瘫疗效观察.doc
- A型行为问卷评估A型行为及冠心病关系应用探究.doc
- BALB-c小鼠黑色素瘤B16移植肿瘤模型建立.doc
- BALB-c鼠肝脏枯否细胞不同分离培养方法比较.doc
- Bard自动活检枪在肿瘤病理诊断中临床应用.doc
- Barrett食管诊断及其及食管腺癌关系.doc
- Bcl-2基因在阻塞性黄疸大鼠肝细胞凋亡中作用.doc
- 2025山东省环保发展集团生态有限公司及权属企业社会招聘10人笔试备考试题及答案解析.docx
- 2025四川电子科技大学专职辅导员招聘笔试备考试题及答案解析.docx
- 2025四川广安市广安区图书馆招聘见习生3人笔试备考试题及答案解析.docx
- 2025山东省环保发展集团生态有限公司及权属企业招聘10人笔试备考试题及答案解析.docx
- 2025山东师范大学附属小学招聘4人笔试备考试题及答案解析.docx
- 2025四川九华光子通信技术有限公司招聘工艺工程师4人笔试备考试题及答案解析.docx
- 2025中国水电三局校园招聘笔试备考试题及答案解析.docx
- 2025山东土地资本投资集团有限公司招聘10人笔试备考试题及答案解析.docx
- 2025云南省普洱市孟连县紧密型医共体第一次招聘编外合同制人员(11人)笔试备考试题及答案解析.docx
- 2025中国烟草总公司辽宁省公司人员招聘120人笔试备考试题及答案解析.docx
最近下载
- Hi5622V100 (海思AX3000低成本路由器wifi芯片)用户指南.pdf
- 2023年保安员笔试考前题库500题(含答案).pdf VIP
- 2024年联通智家工程师(初级)认证理论备考试题库(附答案).pdf VIP
- 2012款陆风X8_汽车使用手册用户操作图解驾驶指南车主车辆说明书电子版.doc
- 2024年中考数学压轴题型(安徽专用)专题08 解答题压轴题(几何综合(一)(学生版).docx
- 三农村劳动力转移就业职业技能培训方案.doc VIP
- 2016年大学日语专业四级考试真题.doc VIP
- 三农村劳动力转移培训指导书.doc VIP
- (完整版)军事地形学.pptx
- 联通智家工程师初级认证理论备考试题及答案.doc VIP
文档评论(0)