吡咯喹啉醌对雪旺细胞增殖及NF-κB表达影响.docVIP

吡咯喹啉醌对雪旺细胞增殖及NF-κB表达影响 　【摘要】 ［目的］观察吡咯喹啉醌对雪旺细胞的增殖作用及其对体外培养雪旺细胞NF-κB表达的影响。［方法］新生鼠雪旺细胞体外原代培养及纯化，S-100免疫荧光标记鉴定雪旺细胞，设实验组与对照组，实验组吡咯喹啉醌的浓度为100 nmol／L；加药72 h后提取总mRNA及总蛋白进行RT-PCR和Western blot分析。［结果］采用RT-PCR和Western blot检测NF-κB的表达，结果均表明实验组表达较对照组高(Plt;0.05)。［结论］吡咯喹啉醌可促进雪旺细胞增殖，NF-κB上调在吡咯喹啉醌促雪旺细胞增殖中起作用。 【关键词】 吡咯喹啉醌　雪旺细胞　增殖　NF-κB 　　Abstract: ［Objective］To investigate the effects of pyrroloquinoline quinine (PQQ) on proliferation and expression of NF-κB of Schwann cells. ［Methods］Schwann cells were cultured from sciatic nerves of SD rats in vitro. The Schwann cells were identified and purified by immunofluorescence of S-100 and Ara-C. Experimental group with was 100 nmol/L of PQQ and control group were set up.The expression of NF-κB in Schwann cells was determined by RT-PCR and Western blotting.［Results］The expression of NF-κB were up-ragulated by PQQ in cultured Schwann cells (Plt;0.05).［Conclusion］PQQ could promote the proliferation of Schwann cells and up-regulation of NF-rd3 play an important role in this process. 　 Key words：pyrroloquinoline quinone; Schwann cell; proliferation; NF-κB 　　雪旺细胞(schwann cells，SCs)是周围神经系统的主要胶质细胞，在周围神经损伤、再生和修复过程中发挥重要作用［1］。目前神经再生工程研究飞速发展，SCs作为该领域的种子细胞日益为研究者所重视［2、3］。SCs体外增殖速度缓慢，体外短时间内扩增大量高纯度SCs是神经再生组织工程领域研究的热点。吡咯喹啉醌(pyrroloquinoline quinone，PQQ)是一种不依赖于NAD(P)和FAD的葡萄糖脱氢酶辅基，在生物体内可发挥多种生物学效应，能促进动物的生长发育，细胞的增殖，保护神经细胞并促进其神经生长因子的分泌［4］。先前已有学者将PQQ作用于损伤的周围神经，发现它可以促进周围神经修复及再生［5～7］；而且发现PQQ可以促进SCs分泌生长因子［8、9］；得到了PQQ促进体外培养SCs增殖的最佳作用浓度和最佳作用时间［10］。本实验旨在研究PQQ促进体外培养SCs的增殖并观察其对体外培养SCs的NF-κB表达的影响，进一步探讨PQQ促进SCs增殖效应并揭示其可能的机制。 　 1 材料与方法 　　1.1 材料 　 出生3～5 d SD大鼠20只(武汉大学医学部实验动物中心提供)：DMEM／F12培养基、胎牛血清(Gibco公司)；6孔板(Corning公司)；胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶(Sigma公司)；Trizol、PCR引物(Invitrogen公司)；RT-PCR试剂盒(Fermentas公司)；蛋白裂解液(碧云天公司)；BCA蛋白定量试剂盒(北京普利莱公司)；兔抗NF-κB一抗、羊抗兔二抗(Santa Cruz公司)。 　　1.2 雪旺细胞体外培养及纯化 　 取3～5 d SD大鼠，显微镜下无菌剥离双侧坐骨神经；D-Hanks液漂洗后移入混合酶(含0.25%胰蛋白酶和0.03%Ⅱ型胶原酶)中，于37℃空气摇床中消化40 min；1 000 r/min离心10 min，弃上清后加入5 ml培养液(含10%胎牛血清)，将细胞悬液移入培养瓶中，置于37℃，含5%CO2培养箱中培养；30 min后行差速贴壁去除成纤维细胞，于次日加入阿糖胞苷(Ara-C，10-5 m