拟炎症高NO大鼠原代培养肝细胞的信号转导及生物学效应相关性的分析研究.pdf

堡主笙苎 丝垄生壹望竺查垦堡垡些茎墅塑堕竺堕兰堕!皇竺塑兰鍪壁塑茎竺!!翌 拟炎症高NO大鼠原代培养肝细胞的信号转导 与生物学效应相关性研究 浙江大学湖滨校区 药理学 九七级研究生 陈奕 导 师 楼宜嘉教授 摘 要 肝脏发生急性炎症时，伴随着炎症细胞因子的升高，肝内诱7L型一氧 oxide，NO)。为 化氮合酶表达也异常增高，并生成大量的一氧化氮(nitric 阐明在炎症或感染性肝脏疾病中高NO对肝细胞的生物学影响，探索该击’i 号分子的信号转导途径，以评价NO在肝脏急性炎症的发生、发展与转¨ 中的作用，及药物可能作用的新靶点，本实验采用NO供体硝普钠(sodium nitroprusside，SNP)模拟体内高NO环境，进行如下试验。 1．NO供体ShIP在肝细胞培养液中释放NO动力学研究 肝细胞培养液中释放NO的情况。实验结果表明：(1)避光条件下．SNP番： MEM中自发释放NO量甚微，当有活性巯基，如谷胱甘肽(GSH)或半胱氨 酸(Cys)存在时，NO释放显著增加，与不含巯基的MEM组相比有极显著 国家自然科学基金资助课题 硕士论文 拟炎症高NO大鼠原代培养肝细胞的信号转导与生物学效应相关性研究 mmol·L-lSNP 差异(P0．001)。以25mmol屯。GSH为N0释放通路时，1．543 mmol·L mmol·L‘1 释放NO的峰值为0．63±0．06 I；以25 L—Cys为活 mmol·L～。 (2)0．2，2．0，12．5 性巯基旁路，最大浓度为0．98±0．11 m 和25．0 (3) in mmol·L。1三 加入25mol·L-IGSH或L—Cys，测得0．772，1．543，3．086 1／ 团的原代培养肝细胞实验体系中，SNP可呈浓度依赖性释放No。／ 2．№供体SNP对原代培养大鼠肝细胞存活率的影响 厂 ／经Bliss法测得孵育8hr时，SNP引起体外培养原代大鼠肝细胞50％死 I t．t 亡的浓度为597 mol·L～，95％可信限丸，532—670|lmol·L一。因此后续 实验中所用sNP浓度均无细胞毒作用。／ 3．拟炎症商№大鼠原代培养肝细胞的信号转导 fSNP与原代培养大鼠肝细胞共孵育过程中，以GSNO和cGMP的生成为观 f 察指标，评价拟炎症高NO时，NO的信号转导途径。实验结果表明：(i) 随着SNP浓度的增加和孵育时间的延长，GSNO浓度也有增高。当SNP剂量 为100，200umol·L。时，4 hr培养液中GSNO浓度为83±20、103±20 umol。L-I；8 hr为103±20、125+20u mol·L～；24 hr则为237+30、 11 294±70 mol·L～，与对照组比均有显著差异(P0．05)。