问用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移有时发生快速变化.DOC

1 问：用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？ 　　答：关于漂移问题： 　　1.温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定 　　2.流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等 　　3.柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡 　　关于快速变化问题 　　1.流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定 　　2.泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。 　　3.流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合 2 问：液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？ 　　答：1.筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。 　　2.存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子 3 问：HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法 　　答：1.样品量不足，解决办法为增加样品量 医.学教育网搜集整理 　　2.样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子 　　3.样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器 　　4.检测器衰减太多。调整衰减即可。 　　5.检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数 　　6.检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。 　　7.检测池中有气泡。解决办法为排气。 　　8.记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。 　　9.流动相流量不合适。调整流速即可。 　　10.检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。 4 问：做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？ 　　答：原因可能有： 　　1.泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理； 　　2.比例阀失效，更换比例阀即可； 　　3.泵密封垫损坏，更换密封垫即可； 　　4.溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法； 　　5.系统检漏，找出漏点，密封即可； 　　6.梯度洗脱，这时压力波动是正常的。 5 问：我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？ 　　答：柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。 医学教|育网搜集整理 　　1.拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查； 　　2.把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查； 　　3.将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查； 　　4.更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodyne7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。 6.我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？ 柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。 ① 拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查； ② 把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查； ③ 将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查；只用于使用过的柱子。 ④ 更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodyne 7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。 7.色谱双峰产生的可能及判断和处理 HPLC分析中，在色谱柱正常，样品灵敏度足够，分析方法合适，色谱峰在出峰时间较短的条件下（不包括梯度），峰型应对称而尖锐。但是，在对样品了解程度不够，方法不妥，样品处理方法及进样方式不合理下，会出现各种意想不到的问题，而对色谱峰难以作出合理的解释，尤其对于新手更是如此。下面根据本人几年工作的体会，提出一些看法，向同仁指教。 色谱双峰指的是明是一种物质，但在色谱图中出现双峰，而表明含二种物质。我将这种情况分为四种原因。 1 色谱柱 如果你分析样品时发现每个色谱峰都双峰出现（出峰越快，双峰的可能性会减少），尤其采用单一纯物质时，可以肯定色谱柱出问题－柱头受损或柱头固定相变脏或流失。如果进样量少，原来色谱柱正常，色谱峰的