光皮桦BBX类基因BlCOL3的克隆与表达分析-园艺学报.PDFVIP

园艺学报，2015 ，42 (7) ：1367 –1377. Acta Horticulturae Sinica doi ：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0208；http ：//www. ahs. ac. cn 1367 光皮桦BBX 类基因BlCOL13 的克隆与表达分析 * 窦锦青，程龙军 ，徐凤华，张俊红，童再康 （浙江农林大学亚热带森林培育国家重点实验室培育基地，浙江临安 311300 ） 摘 要：利用 RACE 、RT-PCR 以及基因组步移技术克隆得到光皮桦BlCOL13 全长 cDNA （GenBank 登录号：KP663425 ）、全长 DNA 及其启动子序列。该基因 DNA 全长 2 808 bp ，具有4 个外显子，3 个内 含子；cDNA 全长 1 370 bp，包含 1 140 bp 的开放阅读框，编码含 379 个氨基酸的蛋白。BlCOL13 蛋白 N 、 C 端分别有两个 B-box 和一个 CCT 结构域，属于典型的 BBX 蛋白。以拟南芥中 BBX 蛋白的分类为参照， 通过聚类分析表明 BlCOL13 属于Ⅱ型 BBX 蛋白；克隆得到的BlCOL13 启动子序列长 685 bp，含有多个 与成花、光响应、激素信号转导以及逆境胁迫相关的顺式作用元件。亚细胞定位试验结果表明该基因主 要在细胞核中表达。不同组织中该基因都有一定程度的表达，但在雄花中表达量最高。低温、干旱、ABA 和盐胁迫等非生物逆境都在一定程度上诱导 BlCOL13 的表达，盐胁迫的影响最为明显，表明该基因在光 皮桦逆境响应中可能发挥比较重要的作用。 关键词：光皮桦；Betula luminifera ；BlCOL13 ；BBX ；基因克隆；表达分析 中图分类号：S 68 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2015 ）07-1367-11 Cloning and Expression Analysis of a B-box-type Protein Gene BlCOL13 in Betula luminifera * DOU Jin-qing ，CHENG Long-jun ，XU Feng-hua ，ZHANG Jun-hong ，and TONG Zai-kang （The Nurturing Station of the State key Laboratory of Subtropical Silvicultrue，Zhejiang A F University ，Lin’an ，Zhejiang 311300，China ） Abstract ：The full-length cDNA，genomic DNA and promoter sequence of BlCOL13 were cloned from Betula luminifera with RACE ，RT-PCR and Genome Walking methods respectively. BlCOL13 genomic DNA was 2 808 bp containing 4 exons and 3 introns，and its cDNA was 1 370 bp encoding a protein of 379 amin acids. The BlCOL13 protein contained 2 B-box domains at N terminus and 1 CCT domains at C terminus which was classified into BBX proteins. Basing on the classification rules of BBX in Arabidopsis ，BlCOL13 belongs to type Ⅱ BBX. There are several cis-elements related with flowering ， light-response ，hormone signal transducti