电刺激与电记录方法学.ppt

细胞外电极对探测动作电位形状的变化无大价值。 原因： 由于中枢神经系统的容积有限，电场中的电流线会被压缩而变形，血管、结缔组织等结构的导电系数不一致，加上不同的神经元的活动不一定是同步的。这样胞外电极记录的电流大小和波形会有多种变化，尤其是当电极与活动细胞之间的相对位置稍有变化，所记录的电位大小和形状就会发生显著变化。 因此细胞外微电极一般主要用来测量细胞放电的准确数目， 而不能提供当单个细胞放电大小的可靠资料（定性）。 中心思想 请在此处添加本课中心思想具体内容 中心思想 请在此处添加本课中心思想具体内容 记录电极一般采用盘状电极（动物实验中可采用针型电极或银球电极），置于头顶部与外耳 孔之间的大脑半球外侧面顶点向外7Cm，向后2Cm处（刺激尺神经或正中神经）；或置于顶点向后2Cm处（刺激下肢神经）。无关电极可置两耳或乳突部位。 大脑皮层诱发电位的异常率较脑电图低，但有些病例脑电图正常而大脑诱发电位异常。它可以反映出特异性传导通路的机能状态。 SEP各波的命名有很大的变化。有的作者用P1、N1、P2、N2，也有的用各波最常见潜伏期的毫秒数如P14、N9、N20等来标记Eps。 单极引导法：记录电极通常置于10/20法的O1、O2部位，无 关电极置于耳部或乳突。 双极引导法：可根据需要进行调整。如可用C3-Cz,C4-Cz等。 观察指标： 基本波形：刺激后50~500ms反映皮层功能的晚成分。 潜伏期：P1、N1、P2、N2、P3。 附加指标： N1-P2、P2-N2、N1-N2、N1-P2、P2-N2比值。 10~20系统电极配位法 国际脑电图学会建议使用的标准脑诱发电位配位法。 10~20法，出于头颅大小、形状不完全相同，采用百分数表示距离（即10%和20%）计算电极安放的位置。电极名称与解剖分区相符。 该方法采用3条标志线： 矢状线又称前后中线 ，从鼻根到枕外粗隆； 冠状线，从左外耳孔经顶部Cz到右外耳孔； 颞侧线又称侧连线，从FPz到Oz引两条分别经左、右 外耳孔所连的半环形线。 本 课 作 业 请在此处添加本课作业一。 请在此处添加本课作业二。 请在此处添加本课作业三。 * * 3 mol/L KCL 导电性：微电极内充灌盐溶液 玻璃微电极 2%旁安天蓝 0.5 mol /L 醋酸钠（PH 7.7） 标记电极尖端位置 通阴极电流2~10μA/min 铂丝 微电极电阻：5~20 M? 电阻过小： 〈 1-2M? 表示电极尖端可能折断； 电阻过大： 〉20 M? 表示电极中可能有气泡。 细胞内记录： 10-20 M? 细胞外记录：5-6 M? （2）金属微电极： 优点：电阻低，机械强度高。常用作慢性埋藏电极。 制作较复杂，常用钢、钨（直径0.23~0.25mm）, 其中钨丝金属微电极较为常用。 三、电压钳技术 (The Voltage-Clamp Method) 离子通道 } 细胞膜 离子流 形成动作电位的基础 + + + + - - - - 膜电位 电压钳技术 维持在一个固定水平 了解各种离子在细胞活动过程中的跨膜规律 将欲研究的单一离子流从众多复合的离子流中分流出来 电压钳：定量测定细胞兴奋时的离子电流的方向、振幅和时程。 负反馈放大器 电压钳技术的局限性 电压钳是通过控制膜电流研究离子通道. 1)不能测定单一通道电流,因为钳制的膜面积 较大,包含大量随机开放或关闭的离子通道; 且背景噪音大,可掩盖单一通道的电流; 2)对体积较小的细胞进行此实验技术上有困难 (单个细胞上需放置两根电极). 膜片钳技术(The Patch-Clamp Method) 1-3个离子通道! 离子通道模型的提出及实验证明 20世纪60年代, Hodgkin 和 Huxley 利用枪乌贼巨大轴突，分析了动作电位的产生，并在此基础上建立了Na+ 、K+ 通道模型。 1972年：Katz在对神经肌肉接头后膜的研究中，记录到 n型Ach受体（nAchR）离子通道的电导、平均 开放时间和开放频率。 1976年：Neher和Sakman用膜片钳技术记录到nAchR单个 离子通道电流，并因此获1991年度诺贝尔奖。 1981年：Miledi将生物合成的nAchR的cRNA注射到非洲