第七章节 植物单倍体培养.ppt

第七章 植物单倍体(花药)培养 第七章 植物单倍体(花药)培养(2学时) 本章主要内容： 花粉和花药培养技术 花粉和花药培养应用 本章教学目的与要求 (1)掌握花药培养和花粉培养的区别； (2)了解花药最佳接种时期； (3)掌握花药培养的大致过程； (4)掌握花粉发育的四种途径； (5)掌握花粉培养的大致过程。 第一节 花药和花粉培养技术 一、花药培养是将花粉发育至一定阶段的花药接种到人工培养基上进行培养，以形成花粉胚或愈伤组织进而分化成植株的技术。 二、花粉培养：是将花粉从花药中分离出来进行离体培养的过程。 三、离体单倍体发生途径 1、对称发育途径：均等分裂，形成两个相同的核。 A. 两个细胞再次分裂，一个停止，一个持续分裂，形成愈伤组织。 B.两个细胞分裂中，形成核融合，产生多倍体。 2、不对称发育途径：不均等分裂。形成营养和生殖核 A 生殖核发育途径：生殖核继续分裂，形成多细胞的花粉，进一步发育形成愈伤组织或胚状体。 B 营养核发育途径：营养核继续分裂，形成多细胞的花粉，进一步发育形成愈伤组织或胚状体。 C 营养核与生殖核并发发育途径：营养核和生殖核分别继续分裂，形成多细胞的花粉，进一步发育形成愈伤组织或胚状体。 四、离体小孢子发育的影响因素 植株基因型：裸子植物难，被子植物简单 大白菜：早熟简单，晚熟难。 培养基成分：MS.其次B5.N6培养基。 植物生长条件和生理状态：幼年、开花初期。 小孢子发育状态：单核期（多）。 预处理：低温处理 培养条件：一般温度25℃，光照无或正常光照等 （2）、培养基 基本培养基： MS和H培养基：适合双子叶植物花药培养； B5培养基：适合豆科和十字花科花药培养； N6培养基：适合禾谷类作物的花药培养。 较高浓度蔗糖可诱导花粉形成愈伤组织； 较低 浓度蔗糖可使愈伤组织分化成苗。 小孢子发育状态 花粉发育时期： 适宜时期：单核期,尤其是单核中、晚期(单核靠边期) 4、看护培养 利用花药或花药愈伤组织释放出的活性物质促进花粉小孢子发育。 5、微室培养 利用小的盖玻片和凹穴载玻片形成微室进行花粉培养 5、花粉植株形态发生方式 胚胎发生途径：小孢子发育与合子发育相似，经历球形胚、心形胚、鱼雷形胚、子叶胚等阶段，但没有胚柄。 愈伤组织发生途径：产生愈伤组织，分化出胚状体或不定芽。 鉴定花药和花粉植株染色体倍性的方法： 1、染色体直接计数法 细胞学鉴定，通常取根尖、茎尖等分生组织区进行制片，直接计数染色体数目。 2、间接鉴定 （1）植株形态学鉴定法 单倍体植株瘦弱，叶片窄小，花小柱头长，花粉粒小，不结实。 （2）细胞形态学鉴定 叶片保卫细胞大小、单位面积上的气孔数及保卫细胞中叶绿体的大小和数目与倍性具有高度的相关性。 （3）扫描细胞光度仪鉴定（流式细胞仪） 主要测定叶片单个细胞中DNA的含量确定细胞的倍性，材料的使用量可少到1cm2。 第二节 花药和花粉培养的应用 ----单倍体植株育种 1、诱导形成单倍体，快速获得纯系，缩短育种周期； 2、有利于筛选隐性突变体，提高选择效率; 3、有利于隐性基因控制性状的选择 4、快速获得自交系的超雄株 花粉培养过程： 1）预处理:低温冷藏是最常用的方法 2）表面消毒 3）接种 4）培养形成花粉植株。 花粉---愈伤组织---苗 花粉---胚状体---苗 花粉培养流程 1.烟草花药培养---胚状体发育途径 2.芸苔小孢子培养----胚状体发育途径 3.水稻花药培养----愈伤组织发育途径 外部形态观察：在水稻中，一般叶枕距为5-15cm，颖片淡黄绿色、雄蕊长度接近颖片长度的1/2时，可能为单核靠边期的花粉。 压片染色法：是检测花粉发育时期的简便有效方法，常用染色剂为醋酸洋红。 4、草莓花药培养脱毒 1974年日本：花药培养可以脱除草莓病毒； 花药采取时期 单核期：花蕾4-6mm，花药1mm 花药诱导愈伤组织培养基 MS+IAA4mg/L+BA2mg/L+KT2mg/L+蔗糖30g+琼脂7g/L 增殖分化培养基 MS+GA1mg/L+IBA0.2mg/L+BA1mg/L+蔗糖30g+琼脂7g/L 生根培养基 1/2MS+IBA0.2mg/L+活性炭3g/L+蔗糖20g+琼脂7g/L 草莓花药愈伤组织,再生植株,花药植株 本章小结： (1)花药培养是器官培养，花粉培养属细胞培养。 (2)花药培养一般选择花粉的单核期进行接种。 (3)花药培养包括：选择材料-消毒-接种培养-愈合组织生成-分化出单倍体植株。 (4)花粉的发育途径包括：营养细胞发育、生殖细胞发育、营养和生