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一、沉淀法 名解： 沉淀与结晶： 盐析和盐溶:在高浓度的中性盐存在下，蛋白质（酶）等生物大分子物质在水溶液中的溶解度降低，产生沉淀的过程。 有机溶剂沉淀法：在含有溶质的水溶液中加入一定量亲水的有机溶剂，降低溶质的溶解度，使其沉淀析出。 知识点： 常用的蛋白质沉淀方法有哪些？ 盐析法，等电点沉淀法，有机溶剂沉淀法，非离子型聚合物沉淀法，聚电解质沉淀 金属离子沉淀法 防止蛋白质沉淀的屏障有蛋白质周围的 双电层 和 水化合膜 。 Cohn经验方程式。 在相同离子强度下，盐的种类对蛋白质溶解度的影响有一定差异，一般的规律为：半径小的高价离子的盐析作用较 强 ，半径大的低价离子作用较 弱 。 等电点沉淀的操作条件是 蛋白质分子以两性离子形式存在 和 其分子净电荷为零(即正负电荷相等) 。 溶液的pH大于等电点时，蛋白质带 负 电荷，溶液的pH小于等电点时，蛋白质带 正 电荷。 有机溶剂沉淀时，蛋白质的相对分子质量越大，则有机溶剂用量越 少 ；在溶液等电点附近，则有机溶剂用量越 少 。 在蛋白质颗粒和溶液界面之间的三种电位。 见下题 请简述双电层理论。 在蛋白质颗粒和溶液界面之间存在有三种电位：①胶核表面的电 位φ0，是整个双电层的电位或称Nernst电位；②Stern平面上的 电位φs； ③在滑动面上的电位ξ称ξ电位(或称电动电位)。这三 种电位中只有ξ电位能实际测得，所以认为它是控制胶粒间电排斥 作用的电位。它取决于Nernst电位和反离子的浓度及电荷大小， 即随着溶液中离子浓度和价数的升高，ξ电位下降，从面使颗粒间 斥力强度减小，溶液趋于不稳定，蛋白质也就会沉淀下来。 沉淀法分离蛋白质有哪些特点？ ①分离前期就可使原料液体积很快地减小10－50倍，从而简化生产工艺、降低生产费用，浓缩与纯化合二为一； ②使中间产物保持在一个中性温和的环境； ③可及早地将目标蛋白从其与蛋白水解酶混合的溶液中分离出来，避免蛋白质的降解，提高产物稳定性； ④用蛋白质沉淀法作为色谱分离的前处理技术、可使色谱分离使用的限制因素降低到最少。 蛋白质沉淀的方法有哪些？（请列举5种蛋白质沉淀的方法）。 沉淀和结晶有何区别与联系？ 在本质上同属一种过程，都是新相析出的过程．主要是物理变化，当然也存在有化学反应的沉淀或结晶。 沉淀和结晶的区别在于形态的不同，同类分子或离子以有规则排列形式析出称结晶．同类分子或离子以无规则的紊乱排列形式析出称为沉淀 影响盐析的因素有哪些？ （1） 离子强度对盐析过程的影响 （2） 蛋白质种类：一般而言组成相近的蛋白质，分子量越大，沉淀所需的盐的量越少；蛋白质分子不对称性越大，也越容易沉淀。 （3） 不同种类的盐：对蛋白质溶解度的影响主要是对Ks的影响，Ks较大就意味着盐的盐析效果较好。 （4） 温度和pH值对（β）盐析的影响 如何选择盐析用盐？列举常用的盐析用盐。 A 盐析作用要强 在相同离子强度下，盐的种类对蛋白质溶解度的影响有一定差异，一般的规律为：半径小的高价离子的盐析作用较强，半径大的低价离子作用较弱 （Ks）磷酸钾硫酸钠硫酸铵柠檬酸钠硫酸镁 B 盐析用盐需有较大的溶解度 C 盐析用盐必须是惰性的 D 来源丰富、经济 据此，常用的盐析用盐有 #硫酸铵：溶解度大（767g/L）硫酸钠 磷酸盐 柠檬酸盐 在有机溶剂沉淀中，有机溶剂的选择应该注意哪些？ 所选溶剂和水互溶，而和蛋白不起作用，乙醇、丙酮最常用。 蛋白分子量越大，有机溶剂用量越少。例如丙酮作为沉淀剂时用量与蛋白分子量关系： 丙酮用量＝1.8－0.12ln[蛋白分子量] 一般把蛋白质沉淀过程人为的分为几个步骤？ 1）初始混合：蛋白溶液与沉淀剂在剧烈搅拌下混合 2）晶核生成：形成初始固体小颗粒－晶核 3）扩散限制生长：晶核在Brownian扩散作用下，形成亚微米的核 4）流动引起的生长：核在搅拌下，碰撞聚集成絮体 5）絮体的破碎：松软的絮体在溶液剪切力小，破碎 6）聚集体的陈化：在扩散－凝聚过程中，演变为密度高的、结实的沉淀 简述有机溶剂沉析的原理Cohn方程中，β和Ks的物理意义。据此用盐析法分离蛋白质时可以有哪两种方 法？ β值为蛋白质在纯水中即离子强度为零时的假想溶解度对数值，是pH值和温度的函数，在蛋白质等电点(pI)时最小。 Ks与温度和pH值无关，但和蛋白质及盐的种类有关。 因此，用盐析法分离蛋白质时可以有两种方法： ①在一定的pH值及温度条件下，改 变盐的浓度(即离子强度)达到沉淀 的目的，称为“Ks”分级盐析法。 ②在一定的离子强度下，改变溶液的pH值及温度．达到沉淀的目的，称为“β”分级盐析法 其中，Ks盐析法由于蛋白质对离子强度的变化非常敏感，易产生共沉淀现象，因此常用于提取液的前处理。而β盐析法由于