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食品微生物之检验方法－乳酸菌－嗜酸乳酸杆菌之检验MethodsofTest.PDF
公開日期：104 年 10 月7 日
TFDAM0013.00
食品微生物之檢驗方法 －乳酸菌－嗜酸乳酸桿菌 之檢驗
Methods of Test for Food Microorganisms －Test of Lactic Acid Bacteria －
Lactobacillus acidophilus
1. 適用範圍： 本方法適用於食品中嗜酸乳酸桿菌 (Lactobacillus
acidophilus)之菌種鑑別。
2. 檢驗方法： 將分離純化後之菌株，經DNA 萃取後，以即時聚合酶鏈反
應(real-time polymerase chain reaction, real-time PCR)鑑別菌
種之方法。
2.1. 工作環境：工作平台需寬敞、潔淨、光線良好。檢體前處理、檢體
DNA抽取、real-time PCR試劑配製及 real-time PCR 等檢
驗過程皆需有區隔空間，避免交叉污染。 Real-time PCR
試劑之配製應於 無菌操作台內進行。
註
2.2. 裝置( 1)
2.2.1. 即時聚合酶鏈反應器： Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR
System ，或同級品。
2.2.2. 高壓滅菌釜。
2.2.3. 無菌操作台。
2.2.4. 加熱振盪器：具溫控及振盪功能。
2.2.5. 微量冷凍離心機 (Micro refrigerated centrifuge) ：可達20000 × g ，
並具4℃溫控功能。
2.2.6. 離心機：供各式微量離心管離心用。
2.2.7. 分光光度計：具波長260 nm 、280 nm 。
2.2.8. 冷凍設備：具冷藏及凍結(-20℃)功能。
2.2.9. 旋渦混合器(Vortex mixer) 。
2.2.10.酸鹼度測定儀 (pH meter) 。
2.2.11. 水浴裝置：溫差 ±1℃以內者。
2.2.12. 天平：最大稱重量為2000 g ，靈敏度為0.1 g ；最大稱重量為100
g ，靈敏度為1 mg 。
註 1 ：本方法所使用或提及之產品品牌不代表為同類產品中最好者；
反之，未使用或 未提及之產品品牌亦不代表為同類產品中較差
者。
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公開日期：104 年 10 月7 日
TFDAM0013.00
2.3.試藥
2.3.1. DNA抽取用：適用於革蘭氏陽性細菌 DNA抽取之市售套組 。
註
2.3.2. Real-time PCR用 ( 2)
2.3.2.1. 鑑別試驗用引子及探針
Lactobacillus acidophilus (標的基因: tuf)
引子 F ：5-GGAAGCTCAAGACCAAATCATG-3
引子 R ：5-CTTCTTCAAAACATAAACTTGTG-3
探針P ：5-(FAM)-TCAACACCACGAAGCAATACACCAAC
G-(BHQ 1)-3
Real-time PCR增幅產物大 小39
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