铁皮石斛f2代高抗性品种选育.docVIP

铁皮石斛F2代高抗性品种选育与产业化 项目可行性报告 项目提出背景、意义及必要性 铁皮石斛Dendrobium candidum Wall. Ex Lindl是传统名贵珍稀中药材，具有益胃生津、滋阴清热等独特的功效，是2005版《中华人民共和国药典》收载的3种石斛属植物之一。早在秦汉时期，《神农本草经》就记载铁皮石斛“主伤中、除痹、下气、补五脏虚劳羸瘦、强阴、久服厚肠胃”；1000多年前的道家医学经典《道藏》将铁皮石斛列为“中华九大仙草”之首；李时珍在《本草纲目》中评价铁皮石斛“强阴益精，厚肠胃，补内绝不足，平胃气，长肌肉，益智除惊，轻身延年”；民间称其为救命仙草”， 国际药用植物界称为“药界大熊猫”。对咽喉疾病、肠胃疾病、白内障、心血管疾病、糖尿病和抗肿瘤具有显著疗效特别是对人体肺癌细胞具有极大的抑制作用抑制率高达74.7%~97.2%。20世纪90年代以前，我国药用石斛基本采自热带、亚热带原始森林中的野生资源种植面积约多亩，铁皮石斛软胶囊康源软胶囊(降血糖)、铁皮枫斗颗粒、铁皮石斛含片铁皮石斛明目片品30个销售额亿元，成为浙江省销售量最大的保健产品之一铁皮石斛品种选育因技术保密等原因文献报道很少，但在主产区针对种质资源收集、引种驯化、杂交育种等关键技术及育种策略已经取得了突破性进展。 主产区浙江药业有限公司有限公司关于铁皮石斛原植物，2005 版中国药典记载为黑节草Dendrobium candidum Wall. Ex Lindl.，《中国植物志》（1999）记载铁皮石斛的学名为D. of f icinale，吉占和（1980）、谢宗万（1984）、《中药大辞典》（2006）认为D. of f icinale Kimur et Migo 与D. candidum是同物异名。但包雪声等（2005）提出，D. candidum 和D. of f icinale 是两种植物，其中铁皮石斛的拉丁学名D. of f icinale是1936 年由日本学者木川康一等首次发表的，D. candidum仅产锡金、喜马拉雅山一带，我国不产。目前浙江、云南主栽品种与《中国植物志》记载铁皮石斛（D. of f icinale）描述基本一致。 仙斛号铁皮石斛自花不育，长期以来人工杂交不结实依靠昆虫传播授粉，结实率很资源濒临灭绝昆虫传播授粉品系复杂解决铁皮石斛种植高产与优质之间的矛盾，可溶性多糖可达干重的40%以上，种质资源（样品）是质量评价真伪与优劣鉴别的基础。石斛属为兰科中比较大的一个家族，全球约有1000余种，我国共有74种2变种。长期以来石斛类药材主要利用野生资源，自然繁殖率很低，加之过度采挖，野生资源濒临灭绝，种质资源（样品）收集十分困难。 解决问题的思路：a、采用铁皮石斛特异株的主动诱导。 b、建立石斛研究协作联盟，清查与整理全国石斛科研、生产单位石斛现有资源，包括石斛属各种，铁皮石斛品种、地方品种、农家种及相关类型样品与资源，实现资源高效利用，积极推进与国内、国际资源互补、共享。 继续在石斛主要分布区开展种质资源（样品）补充调查与收集工作。铁皮石斛自花不育，长期以来人工杂交不结实依靠昆虫传播授粉，结实率很资源濒临灭绝昆虫传播授粉品系复杂解决问题的思路：优质、高产、抗性适应性其中优质为首目标性铁皮石斛多活性成分定量分析与主要活性成分群指纹图谱鉴别技术 铁皮石斛化学成分非常复杂，除多糖外其它多数活性成分含量低、干扰因素多，不同成分的含量测定色谱条件不同，色谱分离的难易程度也会有很大区别，因此，建立涵盖大多数活性成分种类含量的铁皮石斛等药材质量评价方法是药材、品种、制剂真伪与优劣鉴别的基础。 解决问题的思路： 利用梯度洗脱，样品前处理方法的摸索，流动相和色谱柱的选择，检测时间和检测波长的改变，达到分离效果。 采用HPLC/UV/MS、HPLC/MS-MS等联用技术，对铁皮石斛药材进行指纹图谱研究，建立6-10种以上有效成分和其他主要特征峰、定性峰的HPLC-DVD和HPLC-MS指纹图谱；在HPLC-MS指纹图谱中，可以根据化合物的质荷比、提取离子色谱（EIC）以及相关文献，对谱图中主要色谱峰进行初步归属。 对于难以用HPLC有效分离的成分部分，以及为了减少复杂的样品前处理过程，将进行CE和CE-MS的方法探索，对HPLC方法进行适当补充。 四、项目创新点 （1）建立铁皮石斛特异株应用全同胞交叉巢式遗传设计的选育理论和方法及建立铁皮石斛多活性成分定量分析、重金属、农残限量指标测定方法，优化涵盖主要活性成分群指纹图谱。 （2）建立铁皮石斛F2代品种创制技术，培育出高抗性（主要是抗寒性与抗病性强）、品质优良、丰产性好、遗传稳定的铁皮石斛F2代新品种。 （3）建立铁皮石斛形态、显微、主要活性成分、化学成分指纹图谱DNA基因芯片相结合的药材及品种