pBac3xP3EGFP和pBacA3EGFP载体在转基因斜纹夜蛾中的表达分析研究.docVIP

华南师范大学 本科学士学位毕业论文 题目：pBac 3xP3 EGFP和pBac A3 EGFP载体 在转基因斜纹夜蛾中的表达研究 指导教师：李雪峰研究员 学生姓名：陈凤丛 学 号：20072501226 院（系）：生命科学学院 专业：生物科学 毕业时间：2011月月摘 要 II ABSTRACT III 1. 绪 论 1 1.1 本课题现国内外的研究概况 1 1.2 本实验研究目的与意义 1 2. 材料与方法 2 2.1 材料 2 2.1.1 实验材料 2 2.1.2 主要试剂 2 2.1.3 主要溶液配制 2 2.1.4 主要仪器 2 2.2 斜纹夜蛾的人工饲养 2 2.3 基因的显微注射 3 2.3.1 斜纹夜蛾卵的收集 3 2.3.2 卵的排列与固定 3 2.3.3 显微注射 3 2.3.4 显微注射后的处理 3 2.3.5 荧光筛选 4 2.4 常用分子技术 4 2.4.1 质粒DNA和基因组DNA的提取 4 2.4.2 目的基因的PCR扩增 4 2.4.3 琼脂糖凝胶电泳 4 3. 结果与分析 5 3.1 pBac3xP3 EGFP在斜纹夜蛾卵中的表达 5 3.2 pBac3xP3 EGFP在幼虫期的表达 5 3.3 pBac3xP3 EGFP在成虫中的表达 6 3.4 pBac3xP3 EGFP和pBacA3 EGFP转座体系的效率比较 7 3.5 pA3 EGFP斜纹夜蛾的分子检测 7 3.6 pBac3xP3 EGFP阳性幼虫的cDNA检测 8 4. 讨论 11 4.1 EGFP在斜纹夜蛾中可以正常表达 11 4.2 两种不同启动子的比较 11 4.3 难于获得阳性个体的原因 12 4.4 转座体系的选择 12 4.5 转基因斜纹夜蛾和家蚕的比较 13 4.6 外源基因的表达 13 4.7 转基因斜纹夜蛾的遗传嵌合性 14 参考文献 15 致 谢 17 摘 要 本研究以肌动蛋白A3启动子与眼部和神经特异性3xP3启动子、增强性绿色荧光蛋白EGFP）基因及SV40 多聚腺苷酸识别序列为元件插入到piggyBac中pBacA3 EGFP 和pBac3xP3 EGFP转座载体将其显微注射入斜纹夜蛾中，检测其是否表达。结果表明载体能在蛾卵中表达，得到阳性个体。pBacA3 EGFP 载体在注射卵的荧光表达率和荧光卵孵化率上显著高于pBac3xP3 EGFP，其孵化幼虫中表达EGFP的比例也较后者高，表明pBacA3 EGFP更适合用于斜纹夜蛾斜纹夜蛾转基因载体的体外瞬时表达不但是成功进行斜纹夜蛾转基因所必需的第一步而且其自身也可以应用于基因的功能研究为斜纹夜蛾后基因组研究奠定了基础。 关键字：斜纹夜蛾，显微注射，pBacA3EGFPpBac3xP3 EGFP，荧光表达In this study, actin A3 promoter and eye and nerve-specific 3xP3 promoter, enhanced green fluorescent protein (EGFP) gene and the SV40 polyadenylation recognition sequence for the device, inserted into the piggyBac then construct pBacA3 EGFP and the pBac3xP3 EGFP transposon vector. They have been microinjected into the early fertilized eggs of S. litura to detect whether the expression. The results showed that the two carriers in the moth eggs can be expressed by positive individuals. Statistical analysis showed that the pBacA3 EGFP fluorescence of vector expression in the injected eggs hatching rate and fluorescence is significantly higher than pBac3xP3 EGFP, the hatched larvae in the proportion of EGFP expression than the latter high, that is more suitable for pBacA3 EGFP Spodoptera litura transposition vector. Litura