分子生物学课件rna的转录.ppt

3 生物信息的传递（上） ＤＮＡ携带着决定蛋白质的氨基酸顺序的信息，但本身不可能是蛋白质合成的模板；实验也表明在无ＤＮＡ存在的场所，可以进行蛋白质的合成；应该还有第二种承载信息的分子，它负责从ＤＮＡ上获得特定遗传信息，然后用于指导蛋白质的合成。 3.1 RNA转录的基本过程 特点： RNA是按5‘-3’方向合成的。 以DNA双链中的反义链为模板。 由RNA聚合酶催化。 底物为四种三磷酸核苷（AUGC）。 不需要引物。 3.1.1 模板识别（template recognition) 3.1.2 转录起始（initiation) 在DNA上开始转录的第一个碱基规定为+1,与转录相反的方向称上游（upstream），转录方向为下游(downstream); 在上游方向与转录起始位点相邻的位置定位-1。 3.1.3 转录延伸（elongation) 3.1.4 转录的终止 终止子是转录终止的信号序列。它引发延伸聚合酶从DNA上脱落，并且释放出已合成的RNA连。 所有原核和某些真核生物的终止子要求转录出来的RNA3’端具有发夹的二级结构，茎部富含GC序列。 转录的终止依赖于RNA产物，而不是由特定DNA序列决定的。 3.2 转录机器的主要成分 3.2.1 RNA聚合酶 （依赖DNA的RNA聚合酶 DDRP） 以DNA为模板 5‘-3’连续合成 需要Mg2+或Mn2+ 缺乏外切酶活性，没有校正功能 不需要引物 β亚基是酶和核苷酸底物结合的部位。 利福平（ rifampicin）和利福霉素（rifamycin）可与β亚基结合，从而阻止转录的起始，但不影响RNA链的延伸；这类抗生素不抑制真核生物RNA聚合酶，因而被用于治疗 G阳性菌的感染和结核。 另一类抗生素利迪链菌素 (streptolydigins) 抑制转录的延伸.这表明β亚基可能含两个结构域，分别负责转录的起始和延伸。 βˊ亚基是酶和DNA模板结合的主要部位. A polyanion（多阴离子），heparin（肝素）能与 βˊ亚基结合。因此，它们能与DNA竞争结合RNA聚合酶而抑制体外（in vitro）转录。 σ 亚基（σ factor ）的功能是帮助核心酶识别启动子，它不是RNA链延伸必需的。 σ能提高RNA聚合酶与特异启动子的亲和力，也能降低与非特异启动子的亲和力。 新生RNA链达到6-9个核苷酸，形成稳定的酶-DNA-RNA复合物时，σ因子释放。 Theσ factor 通过降低核心酶与非特异序列的亲和力,和增加其与启动子的亲和力来帮助核心酶识别启动子。 无σ factor 的核心酶也能在DNA模板上合成RNA，但不能正确地起始转录。 E.coli有不同的σ factor 分别转录不同类型的基因。这在基因表达调控中起重要作用。 3.2.2 转录复合物 3.3 启动子与转录起始 3.3.1 启动子区的基本结构 -10序列（Pribnow box） TATAAT或稍有变化的形式，大致出现在-4~ - 13bp之间，保守性 T80A95T45A60A50T95 决定着转录的方向，RNA聚合酶在此部位与DNA结合成稳定的复合物。Pribnow框中DNA序列在转录方向上解开双螺旋结构，形成开放型起始结构。 它的功能是RNA聚合酶牢固结合的位点，是启动子的关键部位。 -35序列 保守性 T82T84G78A65C54A45 -35序列的功能是σ因子初始识别并结合的位点，与RNA聚合酶全酶有很高的亲和性。 -35序列在很大程度上决定了启动子的强度。 3.3.2 启动子区的识别 启动子的功能既受DNA序列的影响，又受其构象的影响，推测RNA聚合酶并不直接识别碱基本身，而是通过氢键互补的方式加以识别。 （类似于酶与底物的结合） 3.3.3 RNA聚合酶与启动子区的结合 原核生物中，四个氨基酸残基直接与启动子-10区的TATAAT序列作用，解开DNA双螺旋。 3.3.4 -10区与-35区的最佳距离 原核生物中，-10区与-35区之间的距离大约是16-19bp，小于15或大于20都会降低启动子活性。 间隔的序列不严格，但是距离的大小可能是决定启动子强度的因素之一。保持适当距离对RNA聚合酶的功能是必要的。 保持启动子这两段序列以及它们之间的距离十分重要，否则就会改变他所控制基因的表达水平。 间隔序列对启动子功能相对并不十分重要；但在90%的启动子中，两序列之间的距离约17bp，或者说相隔2个螺旋左右，因而这两个位点大致在DNA双螺旋的同一侧。 不同启动子起动效率不同，分为强启动子（1-2sec启动1次转录）和弱启动子（至少10min才启动1次转录）。 上升突变(up mutation)和下降