荧光素FITC标记抗体的原理和操作方法.doc

荧光素FITC标记抗体的方法中文名称： 异硫氰酸荧光素酯 中文别名： 荧光素-5-异氰酸酯; 异硫氰酸荧光酯异构体; 异硫氰酸荧光橙红; 异硫氰酸荧光红; 异硫氰酸荧光黄; 异硫氰酸荧光素（同分异构体I）; 荧光素5-异硫氰酸盐,异构体1,95%; 异硫氰酸荧光素异构体1.95+%; 异硫氰酸荧光素 英文名称： Fluorescein isothiocyanate isomer I 英文别名： Fluorescein isothiocyanate, isomer 1; 5-FITC; 5-Isothiocyanato fluorescein; FITC; FITC-CELITE(R); FITC ISOMER; FITC ISOMER I; FITC, ISOMER I; FLUORESCEIN ISOMER I ISOTHIOCYANATE; 2-(6-hydroxy-3-oxo-3H-xanthen-9-yl)-5-isothiocyanatobenzoic acid CAS号： 3326-32-7 EINECS号： 222-042-0 分子式： C21H11NO5S 分子量： 389.3807 InChI： InChI=1/C21H11NO5S/c23-12-2-5-15-18(8-12)27-19-9-13(24)3-6-16(19)20(15)14-4-1-11(22-10-28)7-17(14)21(25)26/h1-9,23H,(H,25,26) 分子结构： 密度： 1.46g/cm3 熔点： 360℃ 沸点： 735.6°C at 760 mmHg 闪点： 398.7°C 水溶性： practically insoluble 蒸汽压： 1.02E-22mmHg at 25°C FITC （美凯特货号：MCT-201132） CAS#：3326-32-7 中文名：异硫氰酸荧光素 英文名：Flourescein iso-thiocyanate；FITC ? ? 结构式：? 分子式：C21H11NO5S 分子量：389.38 性质： 1. 外观：黄色粉末 2. 纯度：≥95% (HPLC) 3. 产品描述： ????? FITC能和各种抗体蛋白结合，结合后的抗体不丧失与一定抗原结合的特异性，并在碱性溶液中具有强烈的黄绿色荧光。通过在荧光显微镜下观察或流式细胞仪分析可对相应抗原进行定性、定位或定量的检测。用于医学，农学和畜牧等方面，可对由地细菌病毒和寄生虫等所致疾病进行快速诊断。 4. FITC标记抗体流程： （1） 将待交联的蛋白（浓度≥1mg/mL）对交联反应液透析三次4 ，至pH＝9.0。交联反应液配制方法：7.56g NaHCO3，1.06g Na2CO3，7.36g NaCl，加水定容至1 L。 （2） 将FITC溶于DMSO中，浓度为1mg/mL。每次交联使用的FITC均应新鲜配制，避光。 （3） 按P:F（蛋白质:FITC）=1mg:150μg 的比例将FITC缓慢加入于抗体溶液中，边加边轻轻晃动使其与抗体混合均匀，暗处4 反应8 h。 （4） 加入5mol/L的NH4Cl至终浓度50mmol/L， 4 终止反应2 h。 （5） 将交联物在PBS中透析四次以上，至透析液清亮。 （6） 交联物的鉴定 蛋白浓度(mg/mL) = [ A280– 0.31×A495 ] / 1.4 F/P比例: 3.1×A495 / [A280 – 0.31×A495 ]，该值应介于2.5 ~ 6.5之间。 （7） FITC交联的蛋白应置于pH 7.4的磷酸盐缓冲液中，加入0.1% NaN3、1% BSA，4避光保存。 储存条件：4避光保存