青霉素发酵操作手册.doc

青霉素生产使用手册 北京东方仿真技术有限公司 2007年5月 目录 目录 2 第一章 背景知识 5 1.1 青霉素的发现 5 1.2青霉素分类及分子结构 5 1.3青霉素的单位 6 1.4作用机理 6 1.5青霉素的应用 7 第二章 发酵工艺过程 7 2.1 菌种介绍 7 2.2 菌种的保藏 7 2.3 孢子的制备 8 2.4 种子制备 8 2.5 发酵培养基介绍 8 2.6 灭菌 10 2.7 发酵 10 2.7.1发酵的过程控制 10 2.7.2防止染菌的要点 12 2.7.3空气系统的要求 12 2.7.4蒸汽系统的要求 12 第三章 提炼工艺过程 13 3.1发酵液预处理 13 3.2提取 13 3.3精制 15 3.3.1 脱色和去热原质 15 3.3.2 结晶 15 3.4成品鉴定 15 3.5成品分装 16 第四章 操作规程 17 4.1发酵工艺过程 17 4.1.1正常发酵（过程） 17 4.1.2出料 18 4.1.3发酵过程中PH值低 18 4.1.4发酵过程中PH值高 18 4.1.5发酵过程中溶解氧低 18 4.1.6残糖浓度低 18 4.1.7发酵过程中温度高 18 4.1.8泡沫高 18 4.2提炼工艺过程 18 4.2.1预处理操作 19 4.2.2一次BA萃取操作 19 4.2.3一次反萃取操作 20 4.2.4二次BA萃取操作 20 4.2.5脱色罐操作 21 4.2.6结晶罐及抽滤、干燥操作 21 第五章 主要操作画面 23 5.1青霉素工艺流程界面 23 5.2菌种介绍界面 24 5.3孢子制备界面 24 5.4种子制备界面 25 5.5灭菌界面 25 5.6培养基制备界面 26 5.7发酵工艺操作界面 26 5.8发酵罐操作界面 27 5.9菌种曲线界面 27 5.10预处理界面 28 5.11提取流程总貌 28 5.12一次BA萃取界面 29 5.13精制流程总貌 29 5.14脱色操作界面 30 5.15结晶操作界面 30 5.16抽滤、干燥操作界面 31 5.17成品鉴定界面 31 5.18成品分装界面 32 第一章 背景知识 1.1 青霉素的发现 1928年，英国细菌学家Fleming发现污染在培养葡萄球菌的双蝶上的一株霉菌能杀死周围的葡萄球菌。他将此霉菌分离纯化后得到的菌株经鉴定为点青霉，并将这菌所产生的抗生物质命名为青霉素。 1940年，英国Florey和Chain进一步研究此菌，并从培养液中制出了干燥的青霉素制品。经实验和临床试验证明，它毒性很小，并对一些革兰氏阳性菌所引起的许多疾病有卓越的疗效。 1.2青霉素分类及分子结构 青霉素是6－氨基青霉烷酸（6-aminopenicillanic acid, 6-APA）苯乙酰衍生物。侧链基团不同，形成不同的青霉素，主要是青霉素G。工业上应用的有钠、钾、普鲁卡因、二苄基乙二胺盐。5种以上天然青霉素（如青霉素F、G、X、K、F和V等），它们的差别仅在于侧链R基团的结构不同，其中青霉素G在医疗中用得最多，它的钠或钾盐为治疗革兰氏阳性菌的首选药物，对革兰氏阴性菌也有强大的抑制作用。青霉素的结构通式可表示为 1.3青霉素的单位 目前国际上青霉素活性单位表示方法有两种：一是指定单位（unit）；二是活性质量（μg），最早为青霉素规定的指定单位是：50mL肉汤培养基中恰能抑制标准金葡萄菌生长的青霉素量为一个青霉素单位。在以后，证明了一个青霉素单位相当于0.6μg青霉素钠。因此青霉素的质量单位为: 0.6μg青霉素钠等于1个青霉素单位。由此，1mg青霉素钠等于1670个青霉素单位(unit)。 1.4作用机理 已有的研究认为，青霉素的抗菌作用与抑制细胞壁的合成有关。细菌的细胞壁是一层坚韧的厚膜，用以抵抗外界的压力，维持细胞的形状。细胞壁的里面是细胞膜，膜内裹着细胞质。细菌的细胞壁主要由多糖组成，也含有蛋白质和脂质。革兰氏阳性菌细胞壁的组成是肽聚糖占细胞壁干重的50％～80％（革兰氏阴性菌为1％～10％）、磷壁酸质、脂蛋白、多糖和蛋白质。其中肽聚糖是一种含有乙酰基葡萄糖胺和短肽单元的网状生物大分子，在它的生物合成中需要一种关键的酶即转肽酶。青霉素作用的部位就是这个转肽酶。现已证明青霉素内酰胺环上的高反应性肽键受到转肽酶活性部位上丝氨酸残基的羟基的亲核进攻形成了共价键，生成青霉噻唑酰基-酶复合物，从而不可逆的抑制了该酶的催化活性。通过抑制转肽酶，青霉素使细胞壁的合成受到抑制，细菌的抗渗透压能力降低，引起菌体变形，破裂而死亡。 1.5青霉素的应用 临床应用：40多年，主要控制敏感金黄色葡糖球菌、链球菌、肺炎双球菌、淋球菌、脑膜炎双球菌、螺旋体等引起感染，对大多数革兰氏阳性菌（如金黄色葡萄球菌）和某些革兰氏阴性细菌及螺旋体有抗菌作用。优点：