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DNA修复基因MGMT沉默对人脑胶质瘤化疗的影响 中文摘要 、 第三部分siRNA干扰MGMT基因表达的初步研究 MGMTmRNA、MGMT蛋白表达及对BCNU敏感性的效果。 I 载体分别转入T98细胞中，以绿色荧光蛋白(GFP)基因为报告基因，用 流式细胞仪和荧光显微镜观察转染效率和G418筛选4周后质粒表达效率。 Quantitative Chain 采用实时定量PCR(Real．timePolymerase mRNA的表达，WesternBlot测定MGMT Reaction，RQ．PCR)法测定MGMT BCNU的敏感性变化。 2000转染的T98细胞 结果在荧光显微镜下观察：经LipofectimineTM 在转染后48h，在显微镜下可见细胞呈现明显的绿色荧光，说明转染成功。 siRNA质粒载体转 (阴性对照)；由实时定量RT．PCR可知：三种MGMT 染T98细胞后，其MGMTmRNA的表达受到抑制。相对阴性对照而言， 65％；采用Westernblot法对MGMT蛋白表达测定的结果显示：干扰组 siRNAl；T98／MGMTsiRNA2；T98／MGMT (T98／MGMT 蛋白表达量较空白对照组及阴性对照组明显减少，MGMT蛋白的表达在 干扰组间无显著差异；采用MTT法检测转染后T98细胞对BCNU的敏感性： IV DNA修复基因MGMT沉默对人脑胶质瘤化疗的影响 中文摘要 未转染及转染空载体T98细胞的曲线左移。未转染的T98细胞对BCNU耐 140．56u la 药，其ic50茭b g／ml，而转染后的细胞其IC50分别为126．18g／ml la p l,t (阴性对照)、44．50 g／ml(siRNA2)、56．87 g／ml(siRNAl)、23．12 性增加。 2000在转染中表现出稳定、高效和低毒的特点。 结论LipofectimineTM 高。 关键词MGMT基因(06．甲基鸟嘌呤．DNA甲基转移酶)；砒蛆干扰； siRNA；甲基化特异的PCR法(MSP)；转染； 作 者：高薇 指导教师：周岱 V Effectof MGMTGeneonthe forOlioma Abstract Silencing Chemotherapy the Effectof MGMTGeneon Silencing forGlioma Abstract oneof for treatmentfailurein the cau