第221节动物细胞培养和核移植技术.ppt

(1)用于核移植的供体细胞 一般都选用传代10代以内的 细胞，这是为什么？ (2)为什么选用减数第二次分裂的次级卵母细胞作为受体细胞？ ①卵母细胞能使体细胞核的全能性得以表达; ②卵母细胞富含营养物质,能满足早期胚胎发育时对营养的需求; ③卵母细胞体积大,易操作。 培养的动物细胞一般当传代至10-50代时，部分细胞核型可能会发生变化，其细胞遗传物质可能会发生突变，而10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。 (3)诱导动物细胞融合的方 法和原理： (4)为什么不选用供体细胞的细胞核移植而选用供体细胞直接移植？ 供体细胞形态小，取细胞核不方便，直接植入，不用取出细胞核，而且可以减少对供体细胞核的损伤，与去核卵母细胞融合后也能表达细胞核的全能性,这是核移植技术的后来改进；早期,缔造多利羊的时候，是把核取出来放入去核卵母细胞中的。 物理法： 离心、振动、电刺激等 ； 化学法： 聚乙二醇（PEG）、 生物法： 灭活的病毒；常用灭活的仙台病毒 原理：细胞膜的流动性 (5)克隆动物属于哪种生殖方 式？克隆动物有哪几个亲本？ 克隆动物属于无性生殖。克隆产生的新个体的亲本有三个：体细胞核供体、卵母细胞质供体、代孕母体。 (7)你认为体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？ 不是，因为绝大部分DNA来自于供体细胞核,但其核外还有少量的DNA,即线粒体中的DNA是来自于受体卵母细胞；即便遗传物质完全相同，但动物的一些行为、习性也与所处环境有很大关系。 (6)克隆动物的性别取决于哪个亲本？ 体细胞核供体 卵细胞 Ａ母绵羊 Ｂ母绵羊 乳腺细胞 细胞质 细胞核 细胞核移植 胚胎移植 早期胚胎 卵裂 融合后的卵细胞 C母绵羊子宫 多莉羊 分娩 妊娠 多莉羊的培育过程 证明动物细胞核具有全能性 知识回顾 植物细胞工程 植物细胞工程技术 植物细胞工程应用 植 物 组 织 培 养 植 物 体 细 胞 杂 交 植 物 繁 殖 的 新 途 径 作 物 新 品 种 的 培 育 细 胞 产 物 的 工 厂 化 生 产 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体技术 核移植 动物细胞工程常用技术 其它动物细胞工程的基础 动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。 细胞增殖(有丝分裂) ★ 1、概念： 2、原理： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬液 10代细胞 传代培养 无限传代 单个细胞 加培养液 原代培养 细胞株 细胞系 遗传物质已改变 剪碎、用胰蛋白酶 处理（或胶原蛋白酶） 细胞贴壁，出现接触抑制 用胰蛋白酶 处理分瓶传代培养 50代细胞 3、过程 ★ 遗传物质未改变 胰蛋白酶或 胶原蛋白酶 动物组织 分散成单个细胞 细胞悬液 胰蛋白酶或 胶原蛋白酶 原代培养 传代培养 胚胎的细胞或刚出生不久动物的组织 细胞群体 思考： (1)为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 因为这些组织或器官上的细胞分化程度低，增殖能力强，分裂旺盛，容易培养。 (2)为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养。 3、过程 ★ 细胞系 细胞株 (10~50代) (50代以后) 胰蛋白酶或 胶原蛋白酶 动物组织 分散成单个细胞 细胞悬液 胰蛋白酶或 胶原蛋白酶 原代培养 传代培养 胚胎的细胞或刚出生不久动物的组织 细胞群体 思考： (3)用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？ 细胞间的物质主要是蛋白质（胶原纤维）。 胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜 环境pH为7.2～8.4。多数动物 细胞培养的适宜pH为7.2～7.4。 3、过程 ★ 细胞系 细胞株 (10~50代) (50代以后) 胰蛋白酶或 胶原蛋白酶 动物组织 分散成单个细胞 细胞悬液 胰蛋白酶或 胶原蛋白酶 原代培养 传代培养 胚胎的细胞或刚出生不久动物的组织 细胞群体 思考： (4)胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。 3、过程 ★ 细胞系 细胞株 (10~50代) (50代以后) 胰蛋白