生长调节剂及蔗糖浓度对彩叶草组织培养物迷迭香酸含量影响.pdf

山东农业大学项士论文 摘要 彩叶草(Coleus blumei)亦名斑叶洋紫苏、锦紫苏，归唇形科鞘蕊花属。 是有着黄红紫等各种色彩的柔嫩观叶草本或亚灌木花卉，在印度、印尼、 墨西哥等地被视作药用植物。彩叶草中的主要次生代谢产物之一——迷迭 香酸(Rosemarinic acid)是一种多酚羟基酸，具有抗氧化及清除自由基作 用，并具有消炎、免疫调节、抗菌、抗病毒、抗抑郁等生物活性。本研究 利用高效液相色谱法(HPLC)对野生型彩叶草植株中迷迭香酸进行了定性 定量分析，并对迷迭香酸在彩叶草根、茎、叶中的分布进行了检测，从四 种。以高迷迭香酸含量的彩叶草品种叶片为外植体，在含2％蔗糖的B5 培养基中添加不同生长调节剂对其进行愈伤诱导，初步确定了适合愈伤生 长和迷迭香酸合成的培养基配方。将继代多次得到的松散颗粒状愈伤组织 转入含有不同肌醇浓度的上述改良B5液体培养基中进行悬浮培养，最终 筛选得到适合细胞分散的悬浮培养基。用含有不同蔗糖浓度的改良B5培 养基对愈伤组织和悬浮细胞进行诱导，研究蔗糖含量对培养物的生长和迷 迭香酸合成的影响。同时，本研究还对羟基苯丙酮酸酯还原酶(HPPR)基 因在彩叶草不同品种和不同组织中的表达情况及其与迷迭香酸产量的关系 进行了初步的探索。具体结果如下： 根、茎、叶中的分布进行了检测。通过多次实验得出I-IPLC检测条件如下： 分钟；检测波长：325nm。发现彩叶草不同品种、组织中迷迭香酸含量存在 明显差异，四个品种中叶片均有较高的迷迭香酸含量，而根、茎组织中迷 迭香酸含量较低。我们从四个彩叶草品种中筛选得到两个迷迭香酸含量较 高的品种砂J(干重的0．946％)和by2(干重的1．010％)。 2．在含2％蔗糖的B5培养基中添加不同生长调节剂对砂』和矗归 的叶片进行愈伤诱导，结果表明^帕品种的叶片为最适外植体。初步确定 6．BA， 最适合愈伤生长和迷迭香酸合成的生长调节剂配比为2．0mg／L O．5mg／LNAA，0．8mg／L2,4．D，此时愈伤组织的生长指数和迷迭香酸的合成 量均达到最大值，分别为49．7和愈伤干重的25．3％。 生长调节剂及蔗糖浓度对彩叶草组织培养物迷迭香酸含量的影响 3．将继代得到的松散颗粒状愈伤组织转入含有不同肌醇浓度的上述改 良B5液体培养基中进行悬浮培养，最终筛选得到适合细胞分散的悬浮培 的改良B5液体培养基。 4．用含有不同蔗糖浓度的改良B5培养基对愈伤组织和悬浮细胞进 行诱导。研究发现高蔗糖含量对培养物的生长有明显抑制作用，但是对迷 迭香酸的合成有显著的促进作用，组织培养物中迷迭香酸在蔗糖含量为 6％时达到最大生成量，愈伤中迷迭香酸占干重的33．732％，悬浮细胞中 迷迭香酸含量较低，占细胞干重的10．145％，但此时愈伤组织和细胞培养 物短时间内易褐化死亡。综合考虑愈伤组织和悬浮细胞的生长以及迷迭香 酸的生物合成。4％的蔗糖浓度为最佳选择，此时愈伤组织和悬浮培养细胞 中迷迭香酸的含量分别占干重的29．83％和6．243％。· 中的表达情况与迷迭香酸合成量的关系进行了初步的探索。研究发现，彩 叶草中HPPR基因的表达水平与迷迭香酸的含量无明显相关性。针对于不 同品种的彩叶草，HPPR基因在hy3中的表达水平高于其它品种，依次为 表达水平最高，叶片次之，根中表达量最少。 关键词：彩叶草，迷迭香酸，愈伤组织，细胞培养物，HPLC，HPPR， 半定量RT．PCR ．6． 山东农业大学硕士论文 Abstract Coleusblumei all ornamental allover Benth．(Lamiaceae)isplant，growing thewoddi11anenolTrlous