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选修三动物细胞培养和核移植技术
定义: 人们通常将动物组织 消化后的初次培养 称为原代培养。 定义: 当原代培养的细胞处于接触抑制后, 用胰蛋白酶处理,使细胞从瓶壁上脱离下来,然后加入新的培养液,将细胞分离稀释,并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内,这个过程称传代培养.(分瓶培养的过程) 1、无菌、无毒的环境 (添加一定量的抗生素,定期更换培养液) 2、营养(葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、维生素、血清、血浆等。合成培养基) 3、温度和pH 36.5+(-)0.5度, 7.2-7.4 4、气体环境: O2和CO2(95%空气和5% CO2 ) 思考: 1、动物细胞全能性特点? 随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制,分化潜能变窄。细胞核仍具有全能性。 2、动物的细胞培养的理论依据(原理)? 细胞增殖 3、用动物体细胞克隆的动物是通过什么实现的? 核移植 1、动物的克隆与植物克隆一样吗? 7.动物克隆实例很多,多莉就举世闻名,他是怎样得到的? 4:为何常采用减Ⅱ中期的卵母细胞? 核移植技术,动物细胞培养技术,胚胎移植技术 6:此过程使用了哪些技术? 此时细胞核靠近第一极体,可用微型吸管一并吸出细胞核和第一极体 5、体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗?为什么? 不可能! 因为:一、供体动物只提供细胞核,而细胞质中的遗传物质(如线粒体DNA)来自于受体卵母细胞. 二、生物的性状不仅与遗传物质有关,还受环境的影响。 思考题 卵细胞 A母绵羊 B母绵羊 乳腺细胞 细胞质 细胞核 细胞核移植 早期胚胎 卵裂 C母绵羊子宫 胚胎移植 多莉羊 分娩 妊娠 融合后的卵细胞 多莉羊的培育过程 * * 专题2.2动物细胞工程 离体植物器官、组织或细胞 愈伤组织 胚状体 植物体 脱(去)分化 再分化 (芽、根) 植物细胞工程常用的技术手段有哪些? 植物组织培养 使用的培养基: 固体 有机物(蔗糖) 植物激素 提问: 植物体细胞杂交 植物细胞A 植物细胞B 去细胞壁 原生质体融合 杂种细胞 愈伤组织 杂种植株 植物组织培养 植物细胞融合 1、植物体细胞杂交的结果 是产生了? 2、这个过程中涉及的原理是? 杂种植株 细胞膜的流动性 植物细胞的全能性 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体制备 动物细胞核移植 动物细胞工程常用技术 其它动物细胞工程的基础 1、概念:动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖. 2、原理: 为什么要进行动物细胞培养? 细胞增殖 ①原代培养 过程: 放入二氧化碳培养箱中培养 强调一:细胞贴壁过程 ■细胞贴壁:在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。 ■培养瓶或培养皿壁要求:表面光滑、无毒、易于贴附。 ■当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。 强调二:接触抑制 ②传代培养 ▲细胞株:传代细胞一般能传到50代,遗传物质一般不会发生改变,叫细胞株。 强调:细胞系、细胞株 ▲细胞系:传代50代以后不能再传下去,部分细胞遗传物质发生了改变,能连续传代,获得不死性,叫细胞系。 1.2 动物细胞培养过程 胚胎或幼龄动物的组织器官 细胞悬液 10代细胞 50细胞 剪碎 胰蛋白酶 洗涤、稀释、分离 原代培养 用胰蛋白酶分散细胞,说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4,此环境下胃蛋白酶(2.0)没有活性,而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。 比老龄动物的组织细胞增殖能力强,有丝分裂旺盛。分化程度越低,繁殖能力越强,越容易培养。 动物细胞培养不能最终培养成生物体 细胞增殖缓慢,核型可能变化 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质,将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 贴壁生长 接触抑制 10代以内,保持正常二倍体核型 传代培养 细胞株 细胞系 遗传物质未改变 遗传物质改变 3、总结:动物细胞培养过程 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 配置细胞悬液 剪碎用胰蛋白酶处理 10代细胞 转入培养瓶 40-50代细胞 传代培养 无限传代 单个细胞 加培养液稀释 传代10代以内,遗传物质不改变,保持正常二倍体核型。 传代10-50代左右,增长缓慢以至于完全停止,部分细胞核型可能发生变化(遗传物质可能改变) 原代培养特点:细胞贴壁、接触抑制 继续传代培养少部分细胞获得不死性,细胞突变,遗传物质已经改变,等同于癌细胞。 细胞株:一般说遗传物质未改变 细胞系:遗传物质已改变 原代培养 1、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗? 2、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的吗?
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