新世纪胚胎工程发展趋势及存在的问题(朱士恩).ppt

新世纪胚胎工程发展趋向及存在的问题 中国农业大学动物科技学院 朱士恩 Tel/Fax: 010 Email: zhushien@cau.edu.cn 动物胚胎工程定义 在实验室条件下，对动物胚胎加以人为地干预、改造和操作，按照人们的意愿，向生产所需要的某种性别或性能动物的方向发育。 热点研究领域 动物卵子/胚胎超低温冷冻保存技术 MOET育种技术 性别控制技术 转基因技术 动物核移植技术 胚胎干细胞技术 一、超低温冷冻保存技术 定义 将哺乳动物的卵子或胚胎经过特殊处理后置于液氮(-196℃)、液氦(-216℃)或干冰(-79℃)中以达到长期保存该种动物的种质资源，是胚胎工程技术研究的重要环节。 应用范围 卵母细胞的冷冻保存 胚胎的冷冻保存 1 卵母细胞的冷冻保存 意义 适于胚胎移植产业化； 便于运输，利于国内、国际交流； 保存品种资源； 防止自然灾害和疾病传播造成的品种灭绝； 降低活体保种的成本； 使体外受精、克隆和转基因等生物技术开展不受时间和空间的限制。 哺乳动物卵母细胞的超低温冷冻保存 卵母细胞在超低温冷冻中存在的问题 即以下结构容易受到损伤 膜结构 (Ashwood-Smith et al., 1988) 细胞质 (Trounson et al., 1986) 透明带 (Moller and Wassarman, 1989) 染色体 (Bouquet et al., 1993) 细胞骨架(Johnson and Pickering, 1987) 2 胚胎的冷冻保存 方法 常规冷冻法 玻璃化冷冻法 意义 建立“基因库”； 对于胚胎组织学、发育生物学、遗传育种学和胚胎生物技术的基础理论研究具有重要价值； 为组织和器官的冷冻保存提供充分的理论依据； 胚胎移植产业化的重要手段。 哺乳动物的胚胎超低温冷冻保存 小鼠(Whittingham 1972) 牛（Wilmut Rowson,1973） 家兔（Whittingham Adams,1976） 大鼠（Whittingham,1975） 山羊（Bilton et al.,1976） 绵羊（Willadsen et al.,1976） 胚胎玻璃化冷冻保存发展 1985年Rall等首次开发了胚胎玻璃化冷冻法此后，玻璃化冷冻法经 Schefen 等 (1986)、Nakagata (1987)、Kasai 等 (1990)、Zhu 等(1993,1994)、Szélld 等(1994)、Vincent 等(1995)、Saha 等(1996)、Dobinsky 等(1997)研究者的不断改进，使这项技术日趋成熟 。 冷冻操作趋向于快速、简便 冷冻操作趋向于简单、高效 器官和组织冷冻 加拿大蒙特利尔医院外科实验室的Wang Xiang等(2002)将大鼠的整个卵巢置于5-ml cryovials 采用程序化冷冻，解冻后移植，结果卵巢恢复排卵及内分泌功能，并有1例成功受孕。 组织和器官超低温冷冻保存将成为新的研究热点。 存在的问题 冷冻保存的机理的研究尚不十分清楚。 对冷冻保存效果的评价，仍以胚胎在体外培养后的发育率和体内移植后的妊娠率来判断。未能从根本原因上作出定性和定量分析。 冷冻保存效果有待于稳定和提高，其中技术环节有待于规范化、简单化和实用化。 热点研究领域 动物配子/胚胎超低温冷冻保存技术 MOET育种技术 性别控制技术 转基因技术 核移植技术 胚胎干细胞技术 二、利用MOET技术加速家畜 育种和扩繁进程 MOET定义 MOET (Multiple Ovulation and Embryo Transfer) Nicholas(1979)首先提出在奶牛群中使用MOET核心群育种方案；即超数排卵和胚胎移植相结合的育种方式。 可以利用其进行纯种扩繁。 MOET 育种效果 对单胎动物奶牛和羊上意义重大； 大大地缩短牛羊世代间距、提高繁殖效率、加快牛羊育种进程和核心群建立速度； Nicholas等(1983)分别对青年型、成年型奶牛实施MOET育种方案，研究表明： 产奶量的遗传进展比后裔测定体系可以提高30%－89%；青年型MOET 的遗传进展高于成年型。 MOET育种存在的问题 最大的因素是技术问题，其中重要是对超数排卵和胚胎移植成功率影响。 操作规范化 药品标准化 人员专业化 畜群规模化 热点研究领域 动物配子/胚胎超低温冷冻保存技术 MOET育种技术 性别控制技术 转基因技术 核移植技术 胚胎干细胞技术 三、性别鉴定和性别控制技术 定义 通过人为地干预并按人们的愿望使雌性动物繁殖出所需性别后代的一种繁殖新技术。 包括两个研究方向 X、Y精子分离 胚胎性别鉴定 性