第十四章rna合成2009.pptVIP

3. mRNA的剪接 RNA转录过程--RNA合成 基因组DNA 转录起始点 RNA聚合酶 核心酶 ?因子 识别位点 结合位点 ?因子重新使用 终止区 mRNA 5’ 3’ 文字说明 模板链 编码链 第三节　RNA的转录后加工 　原核生物中RNA的加工 　真核生物中RNA的加工 无活性的原初转录产物需经一系列的加工修饰。包括：RNA的裂解，5‘端与3’端的切除、和特殊结构的形成、核苷的修饰以及拼接和编辑等过程，才能转变成成熟的 RNA。 一、 原核生物中RNA的加工 (3) mRNA前体的加工: 原核生物mRNA转录后无需加工，可以直接用于蛋白质 的翻译，可以边转录边翻译。 rRNA前体的加工: 甲基化修饰16S rRNA－－含10个甲基; 23S rRNA－－含约20个甲基 (2) tRNA前体的加工: 酶切修饰 * 核酸内切酶切 tRNA 的两端－－切断 * 核酸外切酶逐个切3’- 端附加顺序－－修剪 * 在tRNA 3’-端加-CCAOH * 核苷酸修饰和异构化 二、 真核生物中RNA的加工 (一) rRNA的转录后加工 1, 甲基化程度比原核生物高, 是snRNA指 导的加工过程. 2, 有的 rRNA 具有核酶的作用. 即自我剪接. rRNA的转录后加工 转录 45S - rRNA 剪接 18S - rRNA 5.8S和28S-rRNA rDNA 内含子 内含子 28S 5.8S 18S 请注意！该剪接不需要蛋白酶！ tRNA转录后加工 剪切、拼接 化学修饰 CCA-OH3′末端的形成 (二)、tRNA的转录后加工 tRNA的转录后加工 tRNA前体 RNA pol Ⅲ TGGCNNAGTGC GGTTCGANNCC DNA RNAaseP、内切酶 tRNA核苷酰转移酶、连接酶 ATP ADP 碱基修饰 （2）还原反应 如：U ? DHU （2） 如：A ? Am （1）甲基化 （1） （1） （3）核苷内的转位反应 如：U ? ψ （3） （4）脱氨反应 如：A ? I （4） 区别与原核生物的转录起始：真核生物启动子由转录因子而不是RNA聚合酶识别。 转录因子：一些蛋白质因子可直接或间接结合RNA聚合酶，通过识别DNA序列中的顺式作用元件而调节启动转录。 与RNA-pol II 转录的启动有关的转录因子 通用因子 上游因子 可诱导因子 （二） 终止子 (terminator) 提供转录停止信号的DNA或RNA序列称为终止子. 两类终止子 不依赖rho终止子 富含GC的回文及 3’-端系列U结构 转录生成的RNA有茎－环状结构 依赖rho终止子 Rho因子: 46kDa 的蛋白质, 六聚体形式存在. 有NTP酶及 解旋酶活性。 原核生物终止子： 原核生物的两类终止子 富含GC的回文及 3’-端系列U结构 不含GC的回文及 系列U结构 形成茎－环状的发夹结构 A-U配对不稳定，解离RNA 二 转录过程 三个阶段： 模板的识别及转录的起始 转录的延长 转录的终止 特点：需要DNA模板，不需要引物，从头开始 （一）转录起始 转录起始需解决两个问题： DNA双链局部解开，使其中的一条链作为转录的模板。（10-20个核苷酸对，形成转录空泡） RNA聚合酶必须准确地结合在转录模板的起始区域。 2. DNA双链解开: -10bp区Pribnow box 双链解开 1. RNA聚合酶全酶 (?2????)与模板结合 3. 在RNA聚合酶作用下发生第一次聚合反应，形成转录起始复合物 RNApol (?2????) - DNA - pppGpN- OH 3? 转录起始复合物: 5?-pppG -OH + NTP ? 5?-pppGpN - OH 3? + ppi 转录的起始－－生成起始复合物 1、原核生物的转录起始 （第一位） （第二位） 4. 第一个磷酸二酯键形成后?亚基从转录起始复合物上脱落 四磷酸二核苷酸 编码链 模板链 RNA-DNA杂交链 转录空泡 RNApol（α2ββ′?）--- DNA---pppGpN-OH3 ′ 转录起始复合物： 双链重新形成 pppGpN----- 5’ 3’ 磷酸二酯键 (二) 转录延长 (NMP) n + NTP (NMP) n+1 +ppi 原核生物与真核生物无太多区别，仅RNA-pol不同 反应通式 1、原核生物的转录延长 σ因子脱落 核心酶构象改变 RNA-pol迅速前移 依次加入NＴP 1、如何延长 R