1型和2型外壳蛋白构建的AAV载体携带HIV_1gag诱导免疫反应的比较研究.pdf

第 23 卷 　第 3 期 病 　　毒 　　学 　　报 Vol . 23 　 No . 3 　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2 0 0 7 年 5 月 CH IN ESE J OU RN AL O F V IROL O GY May 　　　2007 1 型和 2 型外壳蛋白构建的AAV 载体携带 HIV1 ga g 诱导免疫反应的比较研究 1 ,2 # 2 # 2 2 1 1 2 刘红梅 ,余双庆 ,冯霞 ,刘新蕾 ,董小岩 ,吴小兵 , 曾毅 ( 1 中国疾病预防控制中心 　病毒病预防控制所 　病毒基因工程国家重点实验室 ,北京 　100052 ; 2 传染病预防控制国家重点实验室 　病毒病预防控制所 　中国疾病预防控制中心 ,北京 　100052) ( ) 摘要 : 比较两种血清型的腺病毒伴随病毒 A denoassociat ed viru s ,AAV 载体携带 H IV1 g ag 基因肌肉注射诱导 小鼠免疫反应的特点 。分别制备携带 E GFP 和 H IV1 g ag 基因的重组 AAV2/ 1 (AAV 1) 和 AAV2 载体 。小鼠肌 肉注射 rAAV 1E GFP 和 rAAV2E GF P ,观察注射局部 E GFP 的表达 。将 rAAV 1gag 和 rAAV2gag 分别以0 、3 周初免/ 加强方式肌肉注射免疫 BALB/ c 小鼠以及新西兰白兔 。EL ISA 法检测抗 H IV1 Gag P24 蛋白的特异性抗 体 ,细胞内细胞因子染色法检测 Gag 特异性的 C TL 反应 。结果表明 ,rAAV 1E GFP 在小鼠肌肉的表达强度显著高 于 rAAV2E GFP ;用 West ern blot 法和间接免疫荧光法检测 rAAV 1gag 和 rAAV2gag 体外转染的293 细胞 ,均可 检测到 H IV1 Gag 蛋白的表达 ;在小鼠体内 rAAV 1gag 和 rAAV2gag 组均可检测到特异性 P24 抗体 ,抗体滴度 rAAV 1gag 组显著高于 rAAV2gag 组 ;而无论 rAAV 1gag 组还是 rAAV2gag 组 ,特异性 C TL 反应均较低 ,与阴 性对照组相比均无显著性差异 ;两种载体免疫兔子也都可检测到特异性 P24 抗体 , 同样地 ,rAAV 1gag 组显著高于 rAAV2gag 组 。结论 :携带 H IV1 g ag 基因的 rAAV 1 或 rAAV2 以肌肉注射方式免疫小鼠主要诱导特异 Gag 的 体液免疫反应 ;且 rAAV 1 可诱导很强的抗 H IV1 Gag 特异性抗体 ,抗体水平显著高于 rAAV2 。 关键词 : H IV1 g ag ; 腺病毒伴随病毒 ;免疫反应 ( ) 中图分类号 :R3739 ; Q78 　　文献标识码 :A 　　文章编号 :1000872 1 2007 030 17706 　　目前全球 H IV ( Human immuno deficiency vi 稳定地表达外源基因等 ,这些特点使重组 A AV 载 r u s ) 感染 日益严重 ,研制有效的 H IV 疫苗已成为 体用于疫苗研究具有很好的前景[3 ] 。以 A AV 为载 当今科学界的一个重要任务 。但是由于 H IV 的高 体的 H