美洲狮与亚洲黑熊蛔虫ITS序列扩增及序列分析.pdfVIP

中国畜牧兽医 2010年第37卷第8期 生物技术 ·41· 美洲狮和亚洲黑熊蛔虫ITS序列扩增及序列分析 贺现辉1．陈武2，何乐天1一，王培园1，袁子国1。林瑞庆1 (1．华南农业大学兽医学院，广州510642；2．广州动物园，广州510070；3．广州创来生物技术有限公司，广州510640) 摘要：以采自广州动物园美洲狮和亚洲黑熊体内的蛔虫样品为研究对象，提取样品的总DNA，以保守引物对核糖体DNA 列，并首次获得样品的ITS-1与5．8S序列。序列分析结果表明，美洲狮体内蛔虫样品为狮弓首蛔虫，亚洲黑熊体内蛔虫样品 为转移拜林蛔虫。 关键词：美洲狮；亚洲黑熊；蛔虫；核糖体DNA内转录间隔区；序列分析 中图分类号：S852．73 文献标识码：A 文章编号：1671—7236(2010)08—0041—04 蛔虫(ascaris)是一种普遍存在的寄生虫，给生 DNA 产生活带来了极大危害。辨别蛔虫种类在蛔虫的预 1．2主要试剂DNA提取试剂盒WizardTM Clean 防、诊断及治疗方面有着重要作用。传统形态学分 Up MarkerDL 类方法简单易行，操作方便，但由于一些蛔虫种类形 2000、 为Mereck公司产品；rTaq酶、DNA 态相似，难以辨别，特别是虫卵和幼虫阶段，更是难 以区分，因此形态学鉴定有局限性。蛔虫核糖体 司)产品；凝胶图像分析系统为英国UVITEC公司 transcribed DNA内转录间隔区(internalspacer，产品；Biometra ITS)序列具有种内保守，种间有一定程度变异的遗 传学特点，这为分子分类带来了可能。对ITS序列 胶回收试剂盒为上海生工产品；感受态细胞 进行分析，并与基因库里相应序列进行比对，可以为 JMl09为华南农业大学兽医寄生虫学研究室 样品的鉴定提供分子生物学证据(林瑞庆等，2005，保存。 1．3 2008；翁亚彪等，2005；彭仕明等，2008；何光志等，蛔虫DNA提取将虫体样品Alal、Ala2、 2008)。 COncol- 本试验以从广州动物园美洲狮(Puma 洗，重复4次，吸干水分，取约1cm虫体分别放入 1．5 or)和亚洲黑熊(Uh“sthibetanus)肠道内采集的蛔mL消过毒的新离心管内。加入包括蛋白酶K h。然后按 虫作为研究对象，对其ITS序列进行PCR扩增、测在内的消化液，在55℃温度下消化16 WizardTMDNA 序，并与GenBankrM中蛔虫的相应序列进行比较分 Clean—UpSystem试剂盒使用说明 析，对样品进行分子鉴定。为蛔虫的分子鉴定提 进行虫体DNA的提取。 供了科学根据，也为将来同类研究提供借鉴、 1．4 例证。 7；NC2：5’一 1材料与方法 1．1样品材料样品为采自广州动物园美洲狮和 术有限公司合成)，扩增体系为25肛L。PCR反应条 亚洲黑熊肠道内的蛔虫，70％酒精保存，样品编号：