免疫组化技术总结.doc.pdf

丁香园论坛现任版主 wh2008 的免疫组化总结（下载需要注明来源，谢谢合作！） 安徽医科大学 2010.07.16 wh2008 版主——免疫组化经历介绍 我是 2006.08 进入丁香园论坛，当时主要是查找文献来的（从低分区-高分区-骨干战友求助区， 我查到了很多自己急需的文献）。后来经过一段时间的浏览和学习，发现丁香园论坛还是一个以 实验技术交流为主的地方，正好在本课题组建立免疫组化试验方法，于是在论坛内学习、请教， 并结合实践操作，我经历了初级——查找资料和摸索方法；中级—— 问题求助和不断总结；高级 ——难题解答和经验分享。 2008 年 12 月，我在形态版的一个汇总贴—— 【原创】我的免疫组化历程（已上了首页flash和加 入为数不多的丁香通实验技术精彩专题），让我的免疫组化经历得到了进一步的升华。在论坛内 我目前共得到 13 个精华帖，其中有 7 个是关于免疫组化方面的(有免疫组化全园资料整理、经验 和教训总结、亲身案例讲述、难题集锦等等，多是原创经验和心得体会)。 今年，我给研究生上“免疫组化试验课”，从实验中发现许多研究生的确是免疫组化“新手”，他们 只注重如何做和最终的结果，但对为什么这样做不太感兴趣。这在平时带研究生做组化试验也发 现他们一旦按照我之前摸索好的抗体浓度和条件后做出很漂亮的染色结果后，他们就认为自己已 经掌握了免疫组化方法了，结果不求上进，更换一种新抗体后或实验出现异常结果后就很难做出 来了。 当然，免疫组化对于我来说还不能说什么都知道，其实肯定有不懂的问题，只不过我做的多了、 失败多了和思考多了，可能比新手多了解一些其中的诀窍，拿来与大家进行分享。此外，个人经 验不可能面面俱到，还需要更多有经验的战友加入分享、纠正和补充。让我们一起来打造丁美好 的香园论坛——免疫组化精彩专题更新啦！！！ 个人免疫组化感悟（最新原创） 1、方法操作不难，最大的难处是出现异常结果时如何解决？这就需要掌握免疫组化实验原理， 每一步知道为什么这样做，这样你才敢大胆地改革先前的不对的方法步骤。如抗体孵育条件主要 是抗体浓度、温度、时间，这三者一般是相互成反比的（相对），其中浓度是最重要的先决条件， 温度决定反应的速度、时间决定反应的量。就拿温度来说，可以有 4 度、室温、37 度，我推荐 4 度最佳，反应最温和，背景较浅；而 37 度反应速度较快，时间较短；室温我不太提倡，除非 你每次都把环境温度控制在一定的范围，否则，尽量选择前两者。 2、免疫组化最大的优势是定位和定性。相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有定性灵敏度高、 定位较直接准确，是定位检测分析首选方法。尤其对于有些因子的转位研究十分有用。 3、免疫组化结果定量分析的前提是高质量的染色切片。免疫组化结果也能定量分析，但必须是 背景染色浅而特异性染色较深的情况下，分析最为准确，这种原则可能也是我们日常审稿时判定 研究结果的必备条件。 1 丁香园论坛现任版主 wh2008 的免疫组化总结（下载需要注明来源，谢谢合作！） 安徽医科大学 2010.07.16 4、免疫组化实验一定要设置阳性对照和阴性对照。阳性对照一般是用肯定表达这种抗原的切片 来做；阴性对照一般是用 PBS 或非一抗替代一抗来进行反应，其余步骤均一致。前者是排除方 法和实验系统有无问题；后者是排除有无一抗外的非特异性染色。 5、免疫组化的应用广泛，是当前实验研究的最重要方法之一。如今发 SCI 论文时，明显感觉仅 靠量化的数据来发文章很难，加一些形态学数据或图片，老外十分欢迎，可能是怕你学术造假吧。 当然也不能做假阳性或假阴性结果。 6、免疫组化技术掌握与否的鉴定标准是同一切片或不同切片中不同抗原均从摸索浓度或条件而 做出优良的染色切片。我在平时带教中就发现许多研究生把我已经摸索很成熟的反应条件、浓 度、方法步骤，重复运用于同一性质的切片和同一种抗体，做出来后就觉得自己已经掌握了免疫 组化方法，更换一种抗体后，居然连二抗的种属来源都拿错了。失败往往促进你去思考试验原理 和过程，成功有时也加快你自傲。 7、实验方法需要动手+动脑。如今我还不敢说我在免疫组化什么都知道。我只所以