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TECIA法在肿瘤组织药敏试验中应用 　 作者：尹有群，王晓文，卢义生，赵继红 【摘要】 目的：探讨组织块培养—终点染色—计算机图像分析法(TECIA法)的情况以及其在临床上的意义。方法：对46例TECIA法试验进行分析总结。结果：2例结肠癌、1例胃癌、1例直肠癌受污染而致实验失败；实验结果抑制率介于30%左右的临床用药效果不可靠，而50%以上的与临床的疗效相符。结论：TECIA法成功率高，达90%以上，胃肠道肿瘤容易受污染，肿瘤抑制率在50%以上的结果在临床上应用均为有效，介于30%左右的宜作为联合用药。 【关键词】 肿瘤药敏；MTT法；TECIA法 　　肿瘤化疗药物毒副作用大，而且同肿瘤不同个体差别大，而临床的化疗方案过于固定，无法针对不同患者进行选择，当临床医生确定患者对所选用的化疗药不敏感时，药物已产生了严重的毒副作用，而且也可能导致错失最佳的治疗机会。因此，了解患者对各种化疗药物的敏感和耐受情况，对指导临床“个体化”治疗有重要意义，而肿瘤药敏试验是实现“个体化”化疗的科学依据。传统的体外肿瘤药敏试验方法是MTT法，采用新鲜实体瘤标本洗净后制成单细胞悬液，调整细胞数然后放入培养板中加药培养，最后计算肿瘤细胞的存活率来预测肿瘤对药物的敏感性［1］。MTT法采用的是单细胞培养，模拟实体瘤的体内生长环境尚有不足［2］。现介绍一种用组织块培养代替单细胞培养的方法——TECIA法。 　　1 材料与方法 　　1．1 材料 46例恶性肿瘤新鲜标本，其中肺癌4例，结肠癌4例，肝癌5例，乳腺癌17例，子宫颈癌4例，前列腺癌1例，甲状腺癌1例，直肠癌3例，子宫内膜癌2例，食管癌1例，胃癌3例，卵巢癌1例；1640培养液、链霉素、青霉素、二氧化碳培养箱、计算机图像分析仪、无菌操作台或无菌室、无菌手套、培养孔板、封口膜、稀释的各种肿瘤化疗药、培养皿、吸管、滤纸、手术刀片、酒精灯、镊子。 　　1．2 方法 手术切取肿瘤标本，用生理盐水冲洗2次后放入含有培养基的无菌标本瓶中并尽快送检(切除4 h内)。整个过程严格要求无菌；肿瘤组织先用培养液冲洗2次，放入加有链霉素(100万U加5 ml蒸馏水溶解)和青霉素(80万 U加蒸馏水4 ml溶解)各500 μl的培养液中(培养液应变成淡黄色)10 min；培养液冲洗；培养板的各孔中放入拱好的小铁丝网并在上面放滤纸，培养液刚好把滤纸湿润为宜，把肿瘤组织切成1 mm3的小块放在滤纸上，盖上盖子并用封口膜把培养板周边封严，再放进二氧化碳培养箱中培养24 h；取出测定初始面积；根据需要分组加入化疗药，每组6个孔，其中一组不加药作为对照，放入培养箱中作用4 d;在各培养孔中加入25 μl MTT染色4 h并测定终点面积;图像分析计算抑制率;打印报告;追查患者的临床用药情况。 　　2 结果 　　 　　2例结肠癌、1例胃癌、1例直肠癌受污染而致实验失败；实验结果为抑制率介于30%左右的临床有效率不可靠，而抑制率在50%以上的临床用药有一定的疗效。 　　　3 讨论 　　 　　与传统的MTT法的单细胞培养相比较，TECIA法试验方法更稳定，重复性好，试验周期短(5 d)，所需标本量少，可评价率高(90%以上)，采用组织块培养能更好地模拟肿瘤的体内生长环境，能更准确地测定肿瘤组织对化疗药物的敏感性，从而减少同一化疗模式的盲目性，减少由于患者的个体差异和肿瘤的异质性造成的毒副作用，有效提高治疗效果，合理优化化疗开支，避免不敏感化疗药物的费用支出，最终达到降低医疗费用，减轻国家和患者经济负担，自动化程度高(电脑软件自动统计数据并配有图像分析系统)，结果直观可靠(通过测定用药后存活癌组织面积获得化疗药物的抑制率)，为临床制定合理的化疗方案提供了更科学的依据，使肿瘤的“个体化”治疗真正走向成熟；TECIA法的实验原理是，先把肿瘤组织培养一天后用图像分析仪测量每孔组织块的初始面积(area，A)，加入化疗药后培养4 d再测定终点面积(Blue Area，BA)并根据下面公式计算化疗药物的抑制率(inhibition rate， IR)：IR%={1-［(BA处理/A处理)/(BA对照/A对照)］}×100%。IR＜30%为不敏感，IR＞50%为高度敏感，30%＜IR＜50%为敏感。因为在测定初始面积和终点面积时存在一定的主观因素，因此应专人操作，尽可能地减少误差，抑制率介于30%左右的结果最容易受影响。经与临床用药比较，实验结果抑制率在30%左右的临床药效不可靠，但某些作为联合化疗用药，效果尚满意；实验的关键是要把细胞养活并不受污染，因此标本宜尽快处理并送检，最好≤2 h处理并在4 h内送检，标本放置时间过长造成细胞死亡多和容易受污染，影响实验结果；实验必须在绝对无菌的情况下进行，不然受细菌污染造成实验失败，受污染后培养孔里的培养