一种既能防脱片又能提高ER、PR阳性率免疫组化检测方法.docVIP

一种既能防脱片又能提高ER、PR阳性率免疫组化检测方法 　【关键词】 抗原修复；ER、PR检测；免疫组化染色 ［摘 要］ 目的：我们经过反复试验对比选出一种既能防脱片又能提高检测雌激素（ER），孕激素（PR）阳性率和染色强度的方法。方法：选用我科近期乳腺癌并作ER、PR检测，阳性ER（+）、PR（+）和弱阳性ER（±）、PR（±）及阴性的组织蜡块各10例（共30例）。用0.01 ml/L枸橼酸钠缓冲液为抗原修复液，用高压水浴的方法进行抗原修复，然后用二步法，对这30例乳腺癌的组织切片进行免疫组织化学染色。结果：用本方法检测此30例，其ER、PR阳性率有明显提高且染色深易于镜下观察。结论：该检测方法简便安全，能提高ER、PR的阳性率重复性好，显色强，值得推广。 　　［关键词］ 抗原修复；ER、PR检测；免疫组化染色 　　目前用于免疫组织化学染色等抗原修复的方法和试剂多种多样，特别是用于检测雌激素（ER），孕激素（PR）的方法较多。因送检组织经甲醛固定后抗原决定族被醛基交联封闭，无法有效地与抗体结合而显示出来。国内已有许多同行对用于显示石蜡切片上ER、PR的方法和试剂进行了探讨，结果都在一定程度上提高了检测ER、PR的阳性率和染色强度。我们长期用微波进行抗原修复，因多种原因引致结果不稳定，如组织固定是否及时，用于抗原修复的试剂的酸碱度，微波的强度和作用时间的长短、温度、抗体的质量、抗体和显色系统的搭配等等诸多因素都影响检测的结果，为了提高检测ER、PR的阳性率，现将我们采用高压水浴法，用0.01 ml/L枸橼酸钠缓冲液为抗原修复液，对乳腺癌的组织切片上的ER、PR进行检测的方法介绍如下。 　　1 材料与方法 　　1．1 材料 本科室近期已确诊为乳腺癌并已用微波抗原修复及常规免疫组化方法检测为阳性的ER（+）、PR（+）和弱阳性ER（±）、PR（±）及阴性的组织蜡块各10例（共30例），切片厚度4 μm。试剂：第一抗体为兔抗人雌激素受体（ER）单克隆抗体；兔抗人孕激素受体（PR）单克隆抗体（均为浓缩型：用时1∶50的浓度稀释），快捷免疫组化Max Vision TM检测试剂盒（即用型：单抗兔KIT5006）（以上试剂均购于福州迈新生物技术开有限公司）。枸橼酸钠缓冲液（0.01 ml/L）pH6.0。仪器：电磁炉1 900 W，不锈钢高压锅（直径20 cm），立式塑料染色缸。 　　1．2 方法 组织切片经常规脱蜡至水，3%过氧化氢，用微波低档处理1 min，抑制内源性过氧化物酶，蒸馏水洗1 min,放置盛有0.01 ml/L枸橼酸钠缓冲液的立式塑料染色缸内，再将染色缸放入高压锅内，将锅内加入自来水，水位要在染色缸的下三分之一至二分之一处为宜，盖上锅盖，然后将高压锅放置通电的电磁炉上，首先将电磁炉调到高档，待锅内水沸腾至高压锅盖顶的出气口喷气后，盖上压力阀，看到压力阀不停跳动喷气时，将电磁炉调到中档，以保持高压锅内恒定的压力和温度，这样也不会使锅内的水沸腾得太猛将染色缸冲倒。同时，将电磁炉的定时间按钮调到8 min。待8 min后，将高压锅移到工作台上，让高压锅自然降温，降压，取下压力阀，打开锅盖，将盛有组织切片的染色缸取出，放在冷水盆中，使其冷却约至室温后，再进行免疫组化染色。免疫组化染色的过程，我们采用二步法，它不含生物素，可以避免由于生物素引起的非特性背景显色，所以无需正常血清封闭内源性生物素。我们将经抗原修复后的切片， PBS洗3次各3 min,油笔画圈后可直接滴加第一抗体，37 ℃ 1 h，PBS洗3次各3 min，滴加第二抗体，37 ℃ 20 min，PBS洗3次各3 min，DAB显色约1 min~2 min，复染，封片。 　　2 结果 　　我们将30例乳腺癌组织块分成三组，分别各用上述高压水浴法与微波抗原修复法进行免疫组化检测对比，其组织切片上的ER、PR结果显示这三组切片上的ER、PR阳性率均显示本法有明显提高，染色增强，见表1。 　　　表1 三组免疫组化检测对比（略） 　　3 讨论 　　在整个免疫组化染色过程中需经过许多环节，每个环节都可影响到免疫组化检测结果。因送检组织细胞内的蛋白质被醛基交联，导致抗原决定族被封闭，不能与抗体有效地结合。所以只要破坏醛基交联，使抗原决定族充分暴露才能和抗体有效地结合。 　　用于检测乳腺癌组织切片上的ER、PR的抗原修复方法很多。我们为提高检测ER、PR阳性率，参考杂志上国内许多同行探讨、摸索出的种种方法进行实验，其阳性率都有一定程度提高，但有时不稳定，有些方法所用试剂，如盐酸抗原修复法［5］，有刺鼻的气味，其阳性率性提高不明显。又如硫酸铅钾作为抗原修复液［2］，不易配制，液体乳白色混浊，其沉淀物易沉淀于组织切片上，易将DAB吸收，使切片的非特异染色背影加深。EDTA价格较贵。而我