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卵巢癌细胞系来源外来体获得及形态特征观察 　 作者：李奇灵，辛晓燕，卜宁，李亚玲，于月成，方静 【关键词】 卵巢癌 摘要：目的 从8910、TC1、SKOV3、CAOV和3AO卵巢癌细胞系培养上清液中获得外来体。方法 分别培养8910、TC1、SKOV3、CAOV和3AO卵巢癌细胞系，收集上清液，通过多步离心和超滤等方法分离出外来体。电镜下进行形态学观察。结果 8910和3AO细胞系培养上清液中分离出外来体，置于透射电子显微镜下观察，可见具有明显异质性的圆形或椭圆形小囊泡，直径约30-90nm，有完整的包膜。TC1、SKOV3和CAOV细胞系培养上清液中未分离出外来体。结论 8910和3AO卵巢癌细胞系可分泌外来体，两种细胞系来源的外来体在形态和大小上无明显差别，有可能作为卵巢癌免疫治疗的潜在抗原。 　　关键词：卵巢癌；免疫治疗；外来体；细胞系 　　Obtainment and morphologic characteristics of exosomes acquired from ovarian cancer lines 　　ABSTRACT: Objective To obtain exosomes from the cell culture supernatants of 8910, TC1, SKOV3, CAOV and 3AO ovarian cancer cell lines. Methods 8910, TC1, SKOV3, CAOV and 3AO ovarian cancer cell lines were cultured separately and the cell culture supernatants were collected to seperate exosomes with multiple centrifugation and ultrafiltration. Morphology of exosomes were observed with electron microscopy. Results Exosomes were purified in 8910 and 3AO cell culture supernatants. Exosoems exhibited heterogenous round or elliptic microvesicles ranging from 30 to 90 nm in diameter with intact membrane. Exosomes were not purified in TC1, SKOV3, and CAOV cell culture supernatants. Conclusion 8910 and 3AO cell lines may secrete exosomes, which are potential specific antigens for immunotherapy against ovarian cancer cells. 　　KEY WORDS: ovarian cancer; immunotherapy; exosomes; cell line 　　现代西医治疗卵巢癌的原则是以手术为主，辅以化疗和(或)放疗，对暂时不能手术切除者，直接采用化疗和(或)放疗，尽量多的杀灭肿瘤细胞，减轻其对机体的损害。此外，在切除肿瘤和化疗放疗的同时，还需要积极应用免疫治疗在内的生物治疗。树突状细胞(dendritic cell, DC)是目前最有效的抗原递呈细胞，将其作为肿瘤主动免疫治疗手段，已成为肿瘤疫苗研究的热点之一[1]。目前DC介导的肿瘤疫苗主要有抗原肽刺激的DC，肿瘤提取物刺激的DC，肿瘤细胞与DC融合产物及基因转染的DC[23]。 而外来体作为特异性抗原致敏DC，近年来被许多学者所关注。本研究从8910、TC1、SKOV3、CAOV和3AO卵巢癌细胞系培养上清液中分离外来体，有望为卵巢癌的免疫治疗提供理论基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 RPMI1640培养液购自Gibco公司；胎牛血清购自杭州四季青生物制品公司；99.93%重水购自四川火炬化工集团有限责任公司；Centriplus离心超滤管(100KDa)、Amicon Ultra高回收率高流速切向流超滤离心管(100KDa)购自美国Millipore公司；超速低温离心机(美国Beckman公司)。 　　1.2 方法 　　1.2.1 肿瘤细胞的复苏 将装有肿瘤细胞混悬液的冻存管从液氮罐中取出后直接投入设置温度为37℃的快速恒温数显水箱中，不时摇动使其融化。在超净工作台中，用750mL/L乙醇消毒冷冻管外周；打开冷冻管，用吸管吸出细胞悬液