反义寡核苷酸抑制大鼠损伤视神经Nogo-A mRNA表达.docVIP

反义寡核苷酸抑制大鼠损伤视神经Nogo-A mRNA表达 　 作者：袁容娣　叶剑　彭锡嘉　刘少章 【摘要】 　　目的：观察反义寡核苷酸对损伤视神经Nogo-A的影响。方法：实验分为对照组、随机序列组、和2，5，10μmol/L 3种Nogo-A反义寡核苷酸浓度组。大鼠视神经钳夹伤后，采用逆转录-聚合酶链反应法（RT-PCR），半定量分析反义寡核苷酸对损伤视神经Nogo-A mRNA表达量的变化。 结果：反义寡核苷酸均显著降低Nogo-A mRNA的表达 （P lt;0.01），随机序列对Nogo-A mRNA的表达无影响(P gt;0.05)。结论：反义寡核苷酸对视神经损伤后Nogo-A mRNA表达有抑制作用。 【关键词】 反义寡核苷酸　Nogo-A　视神经　创伤　RT-PCR 　　Effects of antisense oligodeoxynucleotides on Nogo-A mRNA expression in injured optic nerves AbstractAIM: To observe the effects of antisense oligodeoxynucleotides (ASODN) on Nogo-A mRNA expression in injured optic nerves. METHODS: A total of 30 rats were divided into five groups: control group, random sequence group and test groups (2μmol/L, 5μmol/L and 10μmol/L Nogo-A antisense oligodeoxynucleotides). reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) method was used in the detection of the levels of Nogo-A mRNA in injured optic nerves. RESULTS: The result of RT-PCR showed that Nogo-A antisense oligodeoxynucleotides could significantly inhibit the expresson of Nogo-A mRNA (Plt;0.01), random sequence antisense oligodeoxynucleotides had no noticeable effect on Nogo-A mRNA. CONCLUSION: Nogo-A antisense oligodeoxynucleotides can inhibit the expresson of Nogo-A mRNA in injured optic nerves. · KEYWORDS: antisense oligodeoxynucleotides; Nogo-A; optic nerve; injury; reverse transcriptase-polymerase chain reaction 　　0引言 视神经损伤是临床常见的眼外伤，迄今仍缺乏有效的治疗手段。研究证实，微环境中存在神经生长抑制因子是成年中枢神经再生能力低下的原因之一,中和或减少神经生长抑制因子可以促进成年哺乳动物RGCs轴突再生。Nogo-A是最具特征性的神经生长抑制因子。2000年美国、英国、瑞士的3个实验室[1-3] 同时报道Nogo基因成功克隆，它编码3种蛋白（Nogo-A,-B,-C）。Nogo-A具有最强的神经生长抑制作用，其抗体IN-1可以中和这种抑制作用。研究表明[4]，反义寡核苷酸对培养的视神经少突胶质细胞Nogo-A的表达具有抑制作用，我们通过在体实验研究反义寡核苷酸对损伤视神经Nogo-A表达的影响。 1材料和方法 1.1材料 8～10wk Wistar雄性大鼠30只，体质量200～250g，由第三军医大学大坪医院野战外科研究所实验动物中心提供，分为实验组、随机序列组及对照组，每组6只，3个实验组分别用2，5，10μmol/L 反义寡核苷酸10μL球后注射，对照组用注射用水10μL。硫代反义寡核苷酸序列为5-TGC TTT CGG TTG CTG AGG TA-3，浓度定为2μmol/L；同时设计一段随机序列，其序列为5-GCA GAC CAG CGC GGA GCT-3。经基因库检索，Nogo-A反义核酸片段仅与Nogo-A有同源性，而随机序列同所有基因均无同源性。由大连Takara公司进行全硫代修饰（高纯度级）。1