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正交实验优选夏枯草提取工艺探究 　【摘要】 目的优选夏枯草的最佳提取条件。方法 以齐墩果酸含量为指标，采用L3(34)正交实验，对影响超声提取的因素（乙醇浓度、乙醇用量、提取时间）进行优选。结果最佳提取条件为乙醇浓度90%，用量20倍，时间40 min。结论 优选夏枯草提取工艺稳定、可行。 【关键词】 夏枯草 正交实验 齐墩果酸 　　Studies on the Orthogonal Experiment for Optimization of Extraction Procedure of Prunella vulgaris L. 　　Abstract：ObjectiveTo optimize the extraction process of Prunella vulgaris L..MethodsThe extraction process of Prunella vulgaris L was optimized by L3(34) orthogonal test with Caryophyllin as index, and with concentration of alcohol, amount of alcohol and extraction time. ResultsThe optimal extraction technology was 90% alcohol, 20 times the amount of herb material with 40 mins. ConclusionThe optimal extraction process is steady and reliable. 　　Key words：Prunella vulgaris L.； Orthogonal test； Caryophyllin 夏枯草为唇形科植物夏枯草Prunella vulgaris L.的干燥果穗，我国各地均产，主产于江苏、浙江、安徽、河南等地［1］。夏枯草临床应用广泛，《中国药典》中载有“清火，明目，散结，消肿”［2］之功效，现代研究表明夏枯草还具有降血脂、降血糖、免疫抑制以及抗肿瘤等作用［3］。夏枯草中含有丰富的三萜类化合物，其中以齐墩果酸（oleanolic acid）和熊果酸（ursolic）的含量最高。现采用正交实验法，以齐墩果酸为指标，对夏枯草的提取条件进行优化选择，为夏枯草的生产和应用提供依据。 　　1 仪器与试药 日立高效液相色谱仪，DAD检测器，EZChrom Elite色谱工作站；KQ-100A型超声波清洗器；电子天平。 夏枯草对照药材及齐墩果酸对照品（中国药品生物制品检定所）。 甲醇为色谱纯，其它试剂为分析纯。 　　2 方法与结果 夏枯草对照药材粉末，60℃干燥至恒重，备用。 　　2.1 提取方法选择实验 　　2.1.1 浸渍法 　　取夏枯草药材粉末1 g，加95%乙醇20 ml，浸渍24 h，时时摇动，滤过，浓缩干燥。 　　2.1.2 加热回流法 　　取夏枯草药材粉末1 g，加95%乙醇20 ml，加热回流2 h，滤过，浓缩干燥。 　　2.1.3 超声法 　　取夏枯草药材粉末1 g，加95%乙醇20 ml，超声30 min，滤过，浓缩干燥。 取上述夏枯草提取物样品，分别测定齐墩果酸含量，结果见表1。可见，3种提取方法中，以超声法提取所得齐墩果酸含量最高，故选用超声法对夏枯草药材进行提取。表1 3种提取方法的比较（略） 　　2.2 提取条件的正交实验以乙醇浓度（A）、乙醇用量（B）、提取时间（C）为考察因素，每个因素各取3个水平。见表2。表2 实验因素水平（略） 　　2.3 正交实验样品中齐墩果酸的含量测定 　　2.3.1 色谱条件 　　色谱柱为Hypersil C18（10 μm，4.6 mm×250 mm）；流动相为甲醇-水-冰醋酸（88∶12∶0.1）；流速1 ml/min；柱温25℃；检测波长210 nm。 　　　2.3.2 对照品溶液的制备 　　精密称取齐墩果酸对照品适量，置10 ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，制成含齐墩果酸5 mg/ml的溶液，作为对照品溶液。 　　2.3.3 标准曲线的绘制 　　精密量取齐墩果酸对照品溶液0.5，1，2，3，4，5 ml分别加流动相定容至10 ml。在上述色谱条件下重复进样3次，10 μl/次，测定峰面积积分值，以峰面积积分平均值Y和浓度C进行线性回归，得回归方程为：Y=19 998 014.3C-54 553.97，r=0.999 9，齐墩果酸溶液在0.25～2.5 mg/ml范围内线性关系良好。 　　2.3.4 精密度实验 　　精密吸取同一份对照品溶液，连续重复进样5次，测定结果RSD为0.09%（n=5）。 　　2