新生儿黄疸及母乳中人巨细胞病毒关系探究.docVIP

新生儿黄疸及母乳中人巨细胞病毒关系探究 　【摘要】 目的：探讨新生儿黄疸的发生与喂养母乳中人巨细胞病毒(human cytomegalovirus HCMV)的关系。方法：产生新生儿黄疸喂养的母乳为黄疸组，正常新生儿喂养的母乳为对照组，检测母乳中HCMVDNA和HCMVIgG，同时检测黄疸新生儿血液中HCMVDNA。结果：黄疸组母乳HCMVDNA阳性率为88.0%，HCMVIgG阳性率为93.0%，血清HCMVDNA阳性率为4.0%，对照组母乳HCMVDNA阳性率为89.0%（P＞0.05），HCMVIgG阳性率为98.0%（P＞0.05），两组母乳HCMVDNA和HCMVIgG的检测结果差异均无统计学意义。结论：新生儿黄疸的发生与母乳中人巨细胞病毒没有关系。 【关键词】 新生儿黄疸；母乳；人巨细胞病毒 　近年来新生儿黄疸有逐渐上升之势，新生儿黄疸的病因有多种，母乳性黄疸（breast milk jaundice, BMJ）是其中一种，母乳性黄疸的致病机制尚不清楚。本研究是通过检测母乳中HCMV，探讨其是否与BMJ有关。 　　1 材料和方法 　　1.1 研究对象 2006年10月至2007年2月来我院新生儿科门诊就诊，有黄疸新生儿100例，年龄12 d～60 d，平均年龄（30.2±10.0）d，用无菌试管取他们喂养的母乳4 ml，另一无菌试管抽取新生儿静脉血2 ml，分离血清，母乳和血清于-20℃保存。同期在我院儿童保健科选取100例正常新生儿喂养的母乳，年龄30 d～48 d，平均年龄（30.6±2.3）d。 　　1.2 试剂和仪器 HCMVDNA 荧光定量PCR检测试剂盒由中山大学达安基因股份有限公司提供，HCMVIgG抗体诊断试剂盒由珠海海泰生物制药有限公司提供，实时荧光PCR仪器iCycler iQ,BIO-RAD(美国)，酶标仪RT-6000（Rayto）。 　　1.3 方法 取1 ml母乳于1.5 ml离心管中，13 000 r/min(15.7 rcf)离心5 min，吸取中间乳清400 μl于一离心管，吸取管底沉淀加入另一离心管。装有400 μl乳清的离心管13 000 r/min离心5 min，吸取中间乳清200 μl于另一离心管作为检测HCMVIgG的标本，标本不做稀释，按试剂说明书操作检测HCMVIgG。装有沉淀的离心管加入1 ml无菌生理盐水，再13 000 r/min离心5 min，去掉上清液，用无菌生理盐水重复洗涤两次，留管底沉淀，向沉淀物中加入50 μl DNA提取液充分混和；血清标本直接取50 μl血清于1.5 ml离心管中，加入50 μl DNA提取液充分混和。100℃加热10 min，然后放4℃保存30 min以上，13 000 r/min离心5 min，取2 μl上清液作为反应模板。DNA扩增条件：93℃预变性2 min，然后93℃ 45 s，55℃ 120 s共做42个循环。结果判断根据荧光强度曲线判断标本或标准达到阈值时所需要的循环数（Ct值），Ct＜40为阳性，Ct 值=0为阴性，根据定量曲线计算病毒载量。 　　1.4 统计分析 应用统计软件SPSS 11.5处理。 　　　2 结果 　　黄疸组和正常对照组分别检测了100例母乳，母乳HCMVDNA阳性率较高，达到88.5%，但两组母乳HCMVDNA阳性率的比较（P＞0.05）和阳性标本平均病毒载量比较（P＞0.05）差异均无统计意义，结果见表1。同时检测了黄疸组的新生儿血清HCMVDNA，只有4例阳性，阳性率为4.0%。阳性血清标本的平均病毒载量为2.7×104 Copies/ml。黄疸组和正常对照组母乳HCMVIgG的阳性率分别为93.0%、98.0%，两组结果比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。 　　表1 两组母乳HCMVDNA检测结果比较（略） 　　注：两组阳性率比较，χ2=0.049，P=0.825；两组阳性标本平均病毒载量比较，t=0.984，P=0.326。 　　表2 两组母乳HCMVIgG检测结果比较（略） 　　3 讨论 　　HCMV属于疱疹病毒科，人一经感染，HCMV可长期潜伏体内，HCMV易潜伏于外分泌腺组织（如乳腺）［1］，我国育龄妇女90%以上都感染过HCMV，本研究母乳中HCMVDNA阳性率高达88.5%，但黄疸组新生儿血液HCMVDNA阳性率只有4.0%，说明虽然母乳HCMV阳性率较高，但新生儿感染HCMV还是较低。黄疸组和正常对照组两组母乳HCMVDNA阳性率的比较（P＞0.05）和阳性标本平均病毒载量比较（P＞0.05）差异均没有统计学意义，说明新生儿母乳性黄疸和母乳中是否带有HCMV没有关系，与资料［2，3］报道不一致。母乳中含有HCMV，同时