电针对大脑中动脉缺血-再灌注模型大鼠脑内5-羟色胺含量及局部脑.docVIP

电针对大脑中动脉缺血/再灌注模型大鼠脑内5-羟色胺含量及局部脑 　【关键词】 电针 　　电针是临床上治疗缺血性脑血管病广泛使用的常规辅助疗法之一。为研究电针治疗缺血性脑血管病的特异性作用并探讨其作用机制，本课题采用栓线法制作大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型，研究电头针、电体针对大鼠脑内5-羟色胺（5-HT）含量及局部脑血流量（rCBF）的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 共采用健康成年SD大鼠29只，来源于华中科技大学同济医学院实验动物中心，雌雄不拘，体重250～300g，随机分为以下4组:（1）假手术组（n=7）:除不插入线栓外，其余手术步骤同模型组;（2）模型组（n=7）:造模完毕1h后外拉尼龙线栓，再灌注2h，即缺血1h再灌注2h;（3）电头针组（n=8）:大鼠造模完毕1h后再灌注时施加电头针2h，选用大鼠手术侧顶颞前、后斜线，以30号0.5寸毫针斜刺入大鼠头皮下12mm。针柄接G6805-2A型电针治疗仪（上海华谊仪器制造厂），电压6V，频率10Hz，连续波形，电流强度以大鼠触须、耳朵微动为度;（4）电体针组（n=7）:大鼠造模完毕1h后再灌注时施加电体针2h，选用大鼠瘫痪侧曲池、合谷、足三里、环跳穴，直刺进针，刺入1～7mm，深度依穴位而定。针柄接G6805-2A型电针治疗仪，刺激参数同电头针组，电流强度以大鼠瘫痪侧肢体跳动为度。大鼠穴位依据人体穴位及大鼠穴位图谱 ［1］ ，结合大鼠解剖结构定位。 　　1.2 造模方法 实验大鼠经6%水合氯醛（35mg/100g）腹腔内注射麻醉后仰卧于手术台上，颈正中切开，分离右侧颈总动脉（CCA）及颈外动脉（ECA）、颈内动脉（ICA），结扎ECA的分支，以保证尼龙线栓准确进入ICA。在距CCA分叉约1cm处结扎CCA，再结扎ECA根部。参照改良Koizums ［2］ 栓线方法在ICA近端备线，远端放置动脉夹，在距CCA分叉点约5mm处切口，插入一段35mm长、直径0.2mm的尼龙线栓（头端5mm段涂一层硅酮使其直径达0.25mm左右并具有一定的弹性和硬度），插入深度平均为（24.5±0.5）mm。线栓进入ICA，穿过大脑中动脉（MCA）起始端直至大脑前动脉（ACA）近端，当线栓进入无抵抗感时，提示插入顺利，扎紧备线，外留10mm长线头，缝合皮肤。再灌注时外拉尼龙线，使其头端回至ICA内即可恢复MCA血供。 　　1.3 5-HT测定方法 实验大鼠手术完毕3h后，立即置于冰盘上断头取出全脑，用冰生理盐水冲洗，滤纸吸干。取出手术侧皮层、纹状体，分别称重，按1ml∶100mg比例加入酸性正丁醇制备匀浆 ［3］ 。脑组织中5-HT先被抽提到酸性正丁醇中，再反抽提入盐酸中与邻苯二甲醛缩合成荧光物质，在RF-510型荧光分光光度计中以365/480nm发出光波长分别测定皮层、纹状体5-HT含量。 　　1.4 rCBF测定方法 将实验大鼠用乙醚麻醉，背位固定于脑立体定位仪上，剃除大鼠头顶部毛发，剪开头皮，暴露其前囟和顶骨，在前囟向右旁开3mm，向后下移3mm处钻一直径2mm的圆孔，掀开骨片，暴露脑组织。接LS-Ⅲ型组织血流仪（北京立新高技术公司），将银制探测电极插入脑组织0.5mm，测量皮层rCBF;测海马rCBF时在前囟向右旁开1.5mm，向后2.8mm处钻孔，探测电极插入深度为2.8mm。参考电极置于大鼠头皮下紧贴枕骨（所测数值均为相对数）。 　　1.5 统计学方法 计量资料的结果用均数±标准差表示，显著性检验用F检验、q检验。 　　2 结果 　　2.1 电针对急性局灶脑缺血/再灌注模型大鼠脑内5-HT含量的影响 模型组大鼠皮层及纹状体5-HT含量显著低于假手术组（Plt;0.01）;电头针组皮层及纹状体5-HT含量显著低于假手术组（Plt;0.01），高于模型组（Plt;0.01）;电体针组皮层5-HT含量显著低于假手术组并高于模型组（Plt;0.01），其纹状体5-HT含量显著高于模型组（Plt;0.01），与假手术组比差异无显著性（Pgt;0.05）;电头针组与电体针组皮层5-HT含量差异无显著性（Pgt;0.05），但电体针组纹状体5-HT含量显著高于电头针组（Plt;0.05）。见表1。 　　表1 电针对急性局灶脑缺血/再灌注模型大鼠脑5-HT含量的影响 （略） 　　注:与假手术组比较， * Plt;0.01;与模型组比较， △ Plt;0.01;与电头针组比较， # Plt;0.05 　 　　2.2 电针对急性局灶脑缺血/再灌注模型大鼠rCBF的影响 模型组大鼠皮层及海马rCBF较假手术组显著降低（Plt;0.01）;电头针组、电体针组皮层rCBF显著低于假手术组并高于模型组（Plt;0.01），而两组海马rCBF显著低于假手术组