白细胞中巨细胞病毒抗原检测及在肾移植临床应用.docVIP

白细胞中巨细胞病毒抗原检测及在肾移植临床应用 　 　　【摘要】 目的建立一种新的快速诊断巨细胞病毒(CMV)感染的方法并初步用于肾移植受者。方法 采用抗CMV抗原的单克隆抗体，运用免疫组化链菌素-生物素标记法对外周血白细胞核中CMV抗原(即刻早期抗原和早期抗原)进行染色，诊断CMV感染。结果共检测肾移植受者72例，CMV活动性感染率为47%(34/72)，CMV病发病为18%(13/72)。CMV抗原阳性细胞数在CMV活动性感染者中平均为11.5/5万WBC，在CMV病者为20.5±17.8/5万WBC。同时检测10名健康人，结果均为阴性。结论该法具有快速、简便、成本低等优点，且能达到定量检测的目的，可用于临床对CMV感染的早期快速诊断。 　　【Abstract】Objective to establish a new method for the diagnosis of human cytomegalovirus(HCMV) infection and disease in renal transplant recipients.Methods labeled streptavidin biotin (LSAB)method with CMV monoclonal antibody was used to detect CMV antigen in peripher、al blood leukocytes.Results CMV antigen positive cells were counted in every5.0×104 wbc. 72 renal transplant recipients wereinvestigated. The rate of CMV active infection was 47% (34/72) and the average count of CMV antigen positive cells was 11.5/5.0×104 WBC. The incidence of CMV disease was 18% (13/72) with a CMV antigen value of 20.5±17.8/5.0×104 WBC. 10 healthy people were also studied and the results of CMV antigen were negative.Conclusions This method provides a rapid, accurateamp;nb sp;and low cost approach to the diagnosis of CMV infection and can be quantified easily. 　　【Key words】 cytomegalovirus infections Antigens, viral Kidney transplantation Labeled streptavidin biotin method 　　巨细胞病毒(cytomegalovirus，CMV)感染在免疫功能正常的健康人极少出现临床症状，而在免疫功能低下或缺失的患者可能会发展成有严重临床症状的CMV病(或称CMV综合征)，威胁患者的生命。在肾移植受者中，由于免疫抑制剂的应用，CMV感染较为常见，约占50%或以上，其中10%～30%可发展成CMV病［1］，导致移植肾功能丧失或患者死亡。因此，对CMV感染进行早期、准确的诊断具有极其重要的意义。我们采用免疫组化链菌素-生物素标记(labeled streptavidin biotin，LSAB)法对外周血白细胞中CMV抗原进行染色从而诊断CMV感染，并将该方法初步应用于临床，达到了早期、快速诊断的目的，现介绍如下。 对象与方法 　　一、研究对象 　　检测1996年2月～1997年3月在本院接受肾移植的受者72例，其中男52例，女20例，年龄26～65岁，平均42.5岁。所有受者术后均用环孢素A＋强的松＋硫唑嘌呤(CSA＋pred＋Aza)三联免疫抑制方案。 　　二、设备及试剂 　　普通光学显微镜； CMV单克隆抗体；LSAB试剂盒(购自丹麦DAKO公司，批号为K9002)；Tris碱。 　　三、CMV抗原检测(LSAB法) 　　1.标本收集和处理：外周静脉血3～5 ml，EDTA抗凝，离心5分钟(500 r/min)，吸取血浆层移入另一离心管。离心8～10分钟(1 000 r/min)，弃去上清液，加0.83% nH4Cl数滴，冰水中作用5分钟，以溶解混杂的红细胞。加大量Tris-盐酸碱缓冲液(TBS)稀释，离心5分钟(600～800 r/min)，弃去上清液