涂片及培养及PCR-RLB检测淋病奈瑟菌比较探究.docVIP

涂片及培养及PCR/RLB检测淋病奈瑟菌比较探究 　 作者：何大源，向华国，杨波，黄玉佳 【摘要】 目的：建立以16S rRNA为靶基因的PCR反向线点杂交技术（RLB）检测淋病奈瑟菌（Neisseria gonorrhoeae, NG），并与涂片法及培养法比较。方法：选择NG 16S rRNA基因设计一对PCR引物，生物素标记下游引物扩增NG DNA，然后与固定在尼龙膜上的特异性寡核苷核探针杂交。并对115例性病高危人群标本进行检测，然后与涂片法与培养法检测结果进行比较。结果：PCR扩增NG DNA的片段长度分别为414 bp。通过对115例临床标本的检测， PCR/RLB的阳性率为31.3%,而涂片法和培养法的阳性率分别为15.7%和21.7%。 结论：PCR/RLB是一种快速、敏感的检测方法，对NG感染的实验诊断具有十分重要的意义。 【关键词】 聚合酶链反应；核酸杂交；淋病奈瑟氏菌 　　The study of Comparing with Smear, Culture and PCRreverse Line Hybridization Assay for Detecting Neisseria Gonorrhoeae 　 Abstract：Objective To develop 16S rRNA PCRreverse line blot hybridization (RLB) assay for detection of N. gonorrhoeae and compare it with smear and culture methods. Methods The DNA from N. gonorrhoeae was amplified with the one set of primer for the 16S rRNA gene. The reverse primers were labeled with biotin. The products were identified by hybridization with its specific oligonucleotide probes labeled with amidogen in a nylon membrane. Then using PCRRLB to detect 115 specimens and compare it with smear and culture methods. Results The length of PCR products was 414 bp. The PCRRLB positive rate (31.3%) is higher than smear (15.7%) and culture (21.7%)(Plt;0.05). Conclusion The results of PCRRLB in detecting N. gonorrhoeae also provided excellent results. It plays the very important role in detecting of clinical pathogens. Key words：Polymerase chain reaction; Nucleic acid hybridization; Neisseria gonorrhoeae 淋病是由淋病奈瑟菌（Neisseria gonorrhoeae ，NG）感染引起的一种常见的性传播疾病（STD），约占全球STD病例的3/4，在我国亦呈逐步蔓延之势［1］。流行病学资料显示NG感染是加速HIV传播的危险因素，所以选择更加特异、敏感的检测方法对于NG的准确诊断及HIV的防治都具有十分重要的意义［2］。近年来核酸扩增技术在NG感染检测方面得到了广泛的应用,特别是PCR技术，相比于传统的培养法，核酸扩增技术具有较高的敏感性和易于标本收集转运。本文利用以16S rRNA基因作为靶基因设计PCR引物,再结合反向线点杂交技术对115份临床标本进行检测，并将结果与涂片法和培养法进行比较。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 标本来源 　　115份性病高危人群标本来源于深圳市福永医院门诊患者，每人同时收集3份标本，1份做涂片，1份做培养，1份做PCR/RLB检测。 　　1.1.2 主要试试剂与仪器 　　Biobyne C 尼龙膜由Pall公司生产，链亲和素过氧化物酶接合物由Roch 公司生产，Taq酶、dNTP购自MBI公司。 Eppendorf公司PCR扩增仪和Shellab杂交箱。 　　1.2 方法 　　1.2.1 涂片 　　标本涂片自然干燥后，革兰染色镜