耐多药结核分枝杆菌基因突变在耐药性检测中应用.docVIP

耐多药结核分枝杆菌基因突变在耐药性检测中应用 　 作者：董亚俊，张小刚，王仲元，陈红兵 【关键词】 耐多药 ［摘 要］ 目的：探讨结核分枝杆菌耐链霉素(SM)和利福平(RFP)的耐药分子机制，应用聚合酶链反应一单链构象多态性(PCRSSCP)同时检测rpsL基因、rpoB基因突变在结核分枝杆菌耐SM和RFP耐药性测定中的应用价值。方法：采用PCRSSCP技术对168株结核分枝杆菌临床分离株rpsL基因、rpoB基因突变同时进行检测。即首先用PCR方法同时扩增RFP、SM的rpoB基因和rpsL基因，然后进行SSCP分析。结果：以结核分枝杆菌H37RV为对照，82株药物敏感株的rpsL基因、rpoB基因均未见SSCP图谱异常。特异性为100％。86株同时耐SM和RFP的耐药株中，68株(79．1％)有rpsL基因图谱异常；81株(94．2％)有rpoB基因图谱异常。结论:rpoB基因突变和rpsL基因突变分别是结核分枝杆菌耐RFP和SM的主要分子机制。应用PCRSSCP技术可同时快速检测结核分枝杆菌SM和RFP耐药性。 ［关键词］ 结核分枝杆菌；药物耐受性；链霉素；利福平；rpsL基因；rpoB基因 Abstract：Objective To study on the molecular mechanisms of rifampin and streptomycinresistant Mycobacterium tuberculosis.Detection rpoB and rpsL gene mutations in rifampin and streptomycinresistant Mycobacterium tuberculosis using Polymorphism(PCRSSCP).Methods 168 clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis of rpoB and rpsL genes were detected using PCRSSCP.Results Strain H37RV was used as control, SSCP pattern of rpoB,rpsL PCR amplification from 82 drug susceptible strains were all the same as control.The specificity was 100%.SSCP pattern of rpsL gene were different from control in 68 drug resistant clinical isolates.SSCP pattern of rpoB gene were different from control in 86 drug resistant clinical isolates.The sensitivity were 79.1%(rpsL),94.2%(rpoB),respectively.Conclusions The results confirm that mutations of rpsL and rpoB genes are the most important mechanisns in streptomycin and rifampin resistant tuberculosis, respectively. Key words:Mycobacterium tuberculosis；Drug resistance；Streptomycin；Rifampin； RpsL gene；rpoB gene 利福平(RFP)、链霉素(SM)是结核病治疗中最重要的两种一线抗结核药物，其耐药情况日益严重。而传统的结核分枝杆菌耐药性测定由于耐药结核分枝杆菌生长极为缓慢，需6周~8周甚至更长时间，不能及时指导临床用药。近年来在耐药性快速测定方面取得了一些进展［1］。有文献报道［2］结核分枝杆菌耐SM的产生与其核糖体蛋白S12编码基因rpsL基因突变有关。而RFP耐药则与RNA聚合酶的β亚基的编码基因rpoB突变有关。因此，建立一种新的快速、有效的药敏试验方法对结核病的早期治疗具有重要的意义。我们在用PCRSSCP方法单独检测rpsL和rpoB基因突变时，发现在非变性聚丙烯酰胺凝胶中，这两种基因的迁移率不同，且位置不重叠，差异很大。因此，我们在一个反应中同时扩增rpsL基因和rpoB基因。在根据其SSCP图谱进行分析，这样就可以同时检测SM和RFP耐药性，大大节省了时间和材料。现将结果报告如下。 1 材料和方法 1．1 菌种来源 结核分枝杆菌H37RV标准株来源于中国药品生物制