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荆州市疾病预防控制中心运行机制探析 　作者：魏丽珍 温登瑰 单保恩 李巧霞 梁文杰 赵泽贞 【关键词】 水果 　　【摘要】 目的 环境中的一些致癌致突变物常通过饮食进入体内，因此人们在减少环境污染的同时，提高饮食中的抗癌因素越来越受到专家学者的关注。为了进一步开发利用植物的新用途及研制保健品等，为肿瘤预防及肿瘤临床治疗提供参考。筛选了五种天然热带水果进行抗突变、致突变或抗癌、致癌同步试验研究。 方法 应用分子毒理学原理，采用SOS抗突变和致突变同步快速试验技术，进行了加与不加大鼠肝脏微粒体酶（S9）系统的试验和重复试验。 结果 五种检品柠檬、芒果、火龙果、柚子及人参果均未显示对丝裂霉素C的致突变毒性，除芒果未发现抗突变性外，其他4种检品均显示不同程度的抗突变阳性，柠檬最强，为强阳性（+++），柚子次之（++），火龙果和人参果均为弱阳性（+）。 结论 柠檬、火龙果、柚子、人参果可能有减少肿瘤化疗药物远期潜在毒副作用的功能，并在预防肿瘤方面有一定作用。 　　关键词 水果 丝裂霉素C SOS试验 抗突变 　　日前随着临床抗肿瘤化疗药物的广泛使用，医源性致癌因素亦逐渐增多，化疗药物在治疗肿瘤的同时又增加了患第二肿瘤的危险性 ［1］ 。对一些可食性中药及蔬菜的抗诱变及抗肿瘤作用报道较多 ［2，3］ ，而对天然热带水果抗突变及抗癌研究报道尚少。天然热带水果具有低糖、低脂、富含维生素及微量元素的优点，是深受国内外人士欢迎和喜爱的食品。丝裂霉素（mitomycin，MMC）是临床常用的抗肿瘤化疗药物之一，故在我室以往研究的基础上，筛选了5种检品应用分子生物学原理进行了抑制MMC的SOS反应检测。利用SOS抗突变和致突变同步试验技术做了加与不加大鼠肝脏微粒体（S9）系统的抗突变与致突变作用的试验及重复试验。 　　1 试验材料 　　1.1 标本来源 五种水果均购自石家庄北国超市鲜品。 　　1.2 对照剂 抗突变阳性对照剂为100mg/ml维生素C（VitC），石家庄制药集团生产;致突变阳性对照剂为0.1mg/ml丝裂霉素（mitomycin，MMC），浙江海正药业股份公司生产;既不致也不抗突变对照剂为0.85%生理盐水（NS）。 1.3 S9混合液 S9混合液中含2份S9原液和3份使用液，每皿加0.5ml。使用液由15mmol/L、pH7.5的磷酸盐缓冲液、3mmol/L的辅酶Ⅱ及10mmol/L MgCl 2 组成。 1.4 培养基制备 每升LB液体培养基中含蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化钠5g，pH7.2，每升半固体顶层琼脂中含琼脂6g，氯化钠0.8g，pH7.2。每升底层营养琼脂培养基含营养琼脂粉41g，按说明书配制。以上3种培养基均经103.43kPa高压灭菌30min。 1.5 标准试验菌株 遇到诱变剂能产生SOS反应致细胞突变后释放噬菌体的菌株为大肠杆菌溶源性菌株GY5027，对该噬菌体敏感的指示菌株为GY4015，两菌株均由第二军医大学生物教研室提供，经鉴定符合病原生物学特性。 　　1.6 试验原理 当GY5027菌株接触到致突变物致癌物即发生SOS反应造成基因突变释放出噬菌体，导致对该噬菌体敏感的GY4015菌体溶解，出现肉眼可见的噬菌斑。 　　2 试验方法 　　2.1 菌种活化、处理 将GY4015及GY5027分别接种于1ml的LB液体培养基中，37℃恒温水浴振荡（180次/min），培养15h。将GY4015及GY5027倒入无菌小离心管中，10000r/min，离心3min，弃去上清液，加入1ml的NS，混匀再次离心弃去上清液，再补充NS至1ml混匀，取其10μl加到NS0.99ml中混匀。将50ml半固体顶层琼脂加热融化后放入48℃恒温水浴中，30min后加入已处理的GY5027菌液50μl和GY4015菌液0.5ml，迅速振荡混匀，取其3ml注入到营养琼脂底平皿上，铺匀待凝。加S9的试验即在加入3ml顶层琼脂的同时加S9混合液0.5ml，并在冰盘上快速操作。 　　　2.2 加检品及对照剂 用无菌镊子取长7cm、宽0.5cm的灭菌滤纸条沾MMC液贴于已含菌的平皿半固体表面直径线，取长2.5cm、宽0.5cm的无菌滤纸条分别沾NS、VitC、MMC对照剂及标本水溶液垂直贴于MMC条上，“+++”状。每皿贴三个检品条，每检品设平行样。 　　2.3 培养 37℃培养，6～12h观察结果。 　　3 结果 　　试验平皿半固体表面菌苔背景生长良好并有自然分布均匀的噬菌斑;MMC的长、短条周围呈密集的噬菌斑，并超过自然背景1倍以上;VitC条周围噬菌斑减至一半或消失，与MMC相交处尤为明显;阴性对照NS周围无明显变化。同时具备以上4条标准为试验成功。检品与VitC条一致则为抗突变阳性，与MMC条