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银环蛇毒中毒检测实验探究 　【摘要】 目的 探讨银环蛇毒中毒检测中不同材料与不同方法的优缺点。方法 采用双向免疫扩散法与间接ELISA法对银环蛇毒中毒的人与动物的不同标本进行检测。结果 双向免疫扩散法死者伤口皮肤组织液、死者心脏血清、死小猪伤口皮肤组织液及死小猪血清标本均未见免疫沉淀带；ELISA法测标本均为阳性。结论 银环蛇毒中毒检测中伤口皮肤组织液和血液都是合适的材料；双向免疫扩散法的检出率较低，而ELISA法则是一种较好的检测方法。 【关键词】 银环蛇毒；免疫电泳法；酶联免疫吸附法 ［Abstract］ Objective To compare the advantages and disadvantages of different samples and different methods in detection for banded krait venom.Methods Double immunodiffusion and enzymelinked immunosorbent assay were used as the methods to detect different samples of people and animal who were bit by banded krait.Results In double immunodiffusion the samples were all negative；with ELISA the samples of wound tissue liquid and blood were all positive.Conclusion Wound tissue liquid and blood are both fitting samples in detection for banded krait venom；double immunodiffusion isn’t adapt to detect banded krait biting patient，but ELISA is an good detection method. ［Key words］ banded krait venom；immunoelectrophoresis；enzymelinked immunsorbent assay 毒蛇咬伤为比较常见的急症之一，近年来随着人民生活水平的提高，食蛇、用蛇的人日益增多，毒蛇咬伤病例逐年大幅度增加。蛇伤的发生具有突发性，且病情危急、病程进展快，常常引起人体脏器的损伤和衰竭，轻者致肢体伤残、重者则引起死亡［1］。而今蛇伤的诊断主要依靠病史和临床表现，因为有重叠特征，要判断所咬伤的蛇的种类很困难，仅仅从临床表现判断，有时会发生误判，导致患者不能及时得到治疗，蛇伤快速诊断方法对于临床蛇伤的正确诊治具有极为重要的意义［2］。同时近年蛇毒中毒的案件也时有发生，判断是否为蛇毒中毒，为何种蛇毒中毒，使得蛇毒检验具有更广泛的意义［3］。 银环蛇毒素是从银环蛇的毒腺中分泌出来的毒液，新鲜毒液呈灰白色、黏稠、具有特殊的腥味。银环蛇一次排毒量约4.6 mg，人致死量1 mg干毒，是世界十大毒蛇之一［4］。由于其排毒量较少，增加了其检测的难度。笔者报告银环蛇咬死者1例，同时用小猪作对照采用不同方法检测不同的标本，以探讨银环蛇毒中毒的检测不同材料与方法的优缺点。 1 材料与方法 1.1 参考标准蛇毒 准确称取本所精制银环蛇粗毒，浓度梯度：0.25 ng/ml、1 ng/ml、4 ng/ml、16 ng/ml、64 ng/ml。 1.2 抗原标本 银环蛇咬死者伤口皮肤组织液，死者心脏血清；银环蛇咬死小猪伤口皮肤组织液，死小猪血清。 1.3 阴性标本 正常人血清，死者周边皮肤组织液，正常猪血清，小猪周边皮肤组织液。 1.4 方法 1.4.1 双向免疫扩散法 用pH 8.6的巴比妥钠缓冲液配制1%琼脂糖凝胶，厚度2～3 mm，自然冷却后打孔（3 mm），孔距10 mm，挑出孔内琼脂，在火焰上缓缓加热以封底，中心孔加抗银环蛇血清，周围孔加蛇毒及被检抗原，每孔加液量均为15 L，置37 ℃水浴箱24～48 h，观察结果。标准阳性血清和被检抗原之间出现白色沉淀线者为阳性，不出现沉淀线者为阴性。 1.4.2 间接ELISA法 以标准蛇毒及抗原标本包被96孔酶标板，37 ℃温育2 h，取出后以pH 7.4 PBS－Tween 20 （0.05 %） 缓冲液洗板3次；再以含3 % BSA 的PBS－Tween 20 （0.01 %） 封闭液每孔100 μl封闭酶标板，37 ℃温育90 min，洗板3次；马抗银环蛇毒抗体配成浓度为10 μg/ml的工作液，以0.1 ml/孔